人體內(nèi)的t-PA蛋白能高效降解由纖維蛋白凝聚而成的血栓,是心梗和腦血栓的急救藥,但是心?;颊咦⑸浯髣┝康膖-PA會(huì)誘發(fā)顱內(nèi)出血。研究證實(shí),將t-PA蛋白第84位的半胱氨酸換成絲氨酸,能顯著降低出血副作用。據(jù)此,先對(duì)天然的t-PA基因進(jìn)行序列改造,然后再采取傳統(tǒng)的基因工程方法表達(dá)該改造后的基因,可制造出性能優(yōu)異的改良t-PA蛋白。(注:如圖表示相關(guān)的目的基因載體及限制酶,PCLY11為質(zhì)粒,新霉素為抗生素)。請(qǐng)回答下列問(wèn)題:
(1)以上制造出性能優(yōu)異的改良t-PA蛋白的過(guò)程被稱為
蛋白質(zhì)
蛋白質(zhì)
工程。已知t-PA基因序列已測(cè)出,且第84位半胱氨酸的模板鏈堿基序列為ACA,而絲氨酸的模板鏈堿基序列為AGA,因此要獲得改造后的目的基因最好采用 化學(xué)合成
化學(xué)合成
法獲得。若t-PA基因可從cDNA文庫(kù)中獲取,cDNA文庫(kù)中的基因 不含
不含
(填“含有”或“不含”)內(nèi)含子序列。
(2)若用PCR技術(shù)擴(kuò)增改良后的t-PA基因,需要在PCR擴(kuò)增儀中加入 2
2
種引物,其作用是 使DNA聚合酶從引物的3'端開(kāi)始連接脫氧核苷酸
使DNA聚合酶從引物的3'端開(kāi)始連接脫氧核苷酸
。在t-PA改良基因與質(zhì)粒pCLY11構(gòu)建基因表達(dá)載體時(shí),需要用限制酶 BglⅡ和XmaⅠ
BglⅡ和XmaⅠ
切割。
(3)以大腸桿菌作為受體細(xì)胞,在含新霉素的培養(yǎng)基中形成菌落的受體細(xì)胞并非都是目的菌株,原因是 導(dǎo)入未連目的基因的質(zhì)粒的大腸桿菌也能在這種培養(yǎng)基上生長(zhǎng)
導(dǎo)入未連目的基因的質(zhì)粒的大腸桿菌也能在這種培養(yǎng)基上生長(zhǎng)
,這時(shí)需選擇呈 白
白
色的菌落,進(jìn)一步培養(yǎng)檢測(cè)和鑒定,以選育出能生產(chǎn)改良t-PA蛋白的工程菌株。