生長素參與植物生長發(fā)育的調(diào)節(jié)，生長素運輸?shù)鞍祝≒INI）對LAA的極性運輸具有重要作用。為研究35S啟動子（一種來自病毒的強啟動子）能否引起下游基因的過量表達，研究人員將35S啟動子與PINI基因轉(zhuǎn)入擬南芥，觀察PINI過量表達對植物的影響。
（1）獲取PINI基因的mRNA后，通過RTPCR擴增獲取PINI基因（DNA）時所需要的酶是 逆轉(zhuǎn)錄酶、Taq酶逆轉(zhuǎn)錄酶、Taq酶。每次PCR循環(huán)分為3步，其中所需溫度最低的一步稱為 退火（或復性）退火（或復性）。
（2）PINI基因不能直接導入受體細胞，需要構建PINI表達載體。構建PINI表達載體的目的是 利于PINI基因在受體細胞中穩(wěn)定存在，并遺傳給下一代；利于PINI基因在受體細胞中表達和發(fā)揮作用利于PINI基因在受體細胞中穩(wěn)定存在，并遺傳給下一代；利于PINI基因在受體細胞中表達和發(fā)揮作用。
（3）為將PINI基因以正確方向插入質(zhì)粒需要雙酶切。在設計引物時，需在引物的5'端加入相應的酶切位點。已知PINI基因的1鏈為轉(zhuǎn)錄的模板鏈，據(jù)圖分析，引物1和引物2的酶切位點分別為 PstI、EcoRIPstI、EcoRI，理由是 因PINI基因中含有XhoI，引物上的酶切位點不能為XhoI，1鏈為轉(zhuǎn)錄的模板鏈，該鏈在啟動子后的方向應為3'→5'，因此，引物2應位于PINI基因的上游，其上應構建EcoRI的酶切位點；引物應1位于PINI基因的下游，其上應構建PstI的酶切位點因PINI基因中含有XhoI，引物上的酶切位點不能為XhoI，1鏈為轉(zhuǎn)錄的模板鏈，該鏈在啟動子后的方向應為3'→5'，因此，引物2應位于PINI基因的上游，其上應構建EcoRI的酶切位點；引物應1位于PINI基因的下游，其上應構建PstI的酶切位點。
（4）提取轉(zhuǎn)基因擬南芥的DNA，用相應引物擴增出35S啟動子和PINI基因。為檢測目的基因是否導入擬南芥，應電泳檢測擴增產(chǎn)物中的 35S啟動子35S啟動子，不檢測另一種的原因是 擬南芥細胞中原本存在PINI基因，檢測PINI基因無法確定外源PINI基因是否導入受體細胞擬南芥細胞中原本存在PINI基因，檢測PINI基因無法確定外源PINI基因是否導入受體細胞。也可在個體水平上進行檢測，方法是 對轉(zhuǎn)基因擬南芥噴灑適宜濃度的除草劑，觀察能否存活對轉(zhuǎn)基因擬南芥噴灑適宜濃度的除草劑，觀察能否存活。
【考點】基因工程的操作過程綜合；DNA片段的擴增與電泳鑒定．
【答案】逆轉(zhuǎn)錄酶、Taq酶；退火（或復性）；利于PINI基因在受體細胞中穩(wěn)定存在，并遺傳給下一代；利于PINI基因在受體細胞中表達和發(fā)揮作用；PstI、EcoRI；因PINI基因中含有XhoI，引物上的酶切位點不能為XhoI，1鏈為轉(zhuǎn)錄的模板鏈，該鏈在啟動子后的方向應為3'→5'，因此，引物2應位于PINI基因的上游，其上應構建EcoRI的酶切位點；引物應1位于PINI基因的下游，其上應構建PstI的酶切位點；35S啟動子；擬南芥細胞中原本存在PINI基因，檢測PINI基因無法確定外源PINI基因是否導入受體細胞；對轉(zhuǎn)基因擬南芥噴灑適宜濃度的除草劑，觀察能否存活
【解答】
【點評】
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發(fā)布：2024/6/22 8:0:10組卷：35引用：1難度：0.6
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1．下列有關基因工程技術和蛋白質(zhì)工程技術敘述正確的是（ ）
發(fā)布：2025/1/5 8:0:1組卷：6引用：1難度：0.7 -
2．幾丁質(zhì)是許多真菌細胞壁的重要成分，幾丁質(zhì)酶可催化幾丁質(zhì)水解。通過基因工程將幾丁質(zhì)酶基因轉(zhuǎn)入植物體內(nèi)，可增強其抗真菌病的能力?；卮鹣铝袉栴}：
（1）基因工程中所用的目的基因可以人工合成，也可以從基因文庫中獲得?；蛭膸彀?和。
（2）生物體細胞內(nèi)的DNA復制開始時，解開DNA雙鏈的酶是。在體外利用PCR技術擴增目的基因時，使反應體系中的模板DNA解鏈為單鏈的條件是。上述兩個解鏈過程的共同點是破壞了DNA雙鏈分子中的。
（3）DNA連接酶是將兩個DNA片段連接起來的酶，常見的有和，其中既能連接黏性末端又能連接平末端的是。當幾丁質(zhì)酶基因和質(zhì)粒載體連接時，DNA連接酶催化形成的化學鍵是。
（4）提取RNA時，提取液中需添加RNA酶抑制劑，其目的是。
（5）若獲得的轉(zhuǎn)基因植株（幾丁質(zhì)酶基因已經(jīng)整合到植物的基因組中）抗真菌病的能力沒有提高，根據(jù)中心法則分析，其可能的原因是。發(fā)布：2025/1/5 8:0:1組卷：2引用：2難度：0.6 -
3．下列有關基因工程的敘述，正確的是（ ?。?/h2>
發(fā)布：2024/12/31 5:0:5組卷：3引用：2難度：0.7