科學(xué)家從某細(xì)菌中提取抗鹽基因,轉(zhuǎn)入煙草并培育成轉(zhuǎn)基因抗鹽煙草。如圖是轉(zhuǎn)基因抗鹽煙草的培育過(guò)程、含目的基因的DNA和質(zhì)粒上的箭頭表示相關(guān)限制酶的酶切位點(diǎn)。請(qǐng)分析回答:
(1)①過(guò)程獲得的抗鹽基因可用PCR技術(shù)進(jìn)行擴(kuò)增,該技術(shù)須用
Taq
Taq
酶,所需的原料是 脫氧核苷酸
脫氧核苷酸
。
(2)已知幾種限制酶識(shí)別序列及其切割位點(diǎn)如表:
限制 |
BanHⅠ |
HindⅢ |
EcoRⅠ |
SmaⅠ |
識(shí)別序列及其切割位點(diǎn) |
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用圖中的質(zhì)粒和目的基因構(gòu)建重組質(zhì)粒,不能使用SmaⅠ酶切割,原因是
SmaⅠ會(huì)破壞質(zhì)粒的抗性基因、外源DNA中的目的基因
SmaⅠ會(huì)破壞質(zhì)粒的抗性基因、外源DNA中的目的基因
。
圖中②過(guò)程為防止質(zhì)粒和含目的基因的外源DNA片段自身環(huán)化,應(yīng)選用
BamHⅠ和HindⅢ
BamHⅠ和HindⅢ
酶對(duì)外源DNA、質(zhì)粒進(jìn)行切割。
(3)圖中④過(guò)程,為篩選出導(dǎo)入了重組質(zhì)粒的農(nóng)桿菌,應(yīng)在培養(yǎng)基中加
M抗生素
M抗生素
。
(4)為確定轉(zhuǎn)基因抗鹽煙草是否培育成功,既要用放射性同位素標(biāo)記的
抗鹽基因
抗鹽基因
作探針進(jìn)行分子雜交測(cè)試,又要在個(gè)體水平上鑒定,后者具體過(guò)程是
將培育的煙草幼苗栽培于含有一定鹽的土壤中,觀察該煙草植株的生長(zhǎng)狀態(tài)
將培育的煙草幼苗栽培于含有一定鹽的土壤中,觀察該煙草植株的生長(zhǎng)狀態(tài)
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