下表是幾種限制酶識別序列及其切割位點,圖1、圖2中標注了相關限制酶的酶切位點,其中切割位點相同的酶不重復標注。請回答下列問題:
限制酶 |
BamHⅠ |
BclⅠ |
Sau3AⅠ |
HindⅢ |
識別序列及切割位點 |
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(1)用圖中質(zhì)粒和目的基因構建重組質(zhì)粒,應選用
BclⅠ和HindⅢ
BclⅠ和HindⅢ
兩種限制酶切割,酶切后的載體和目的基因片段,通過
DNA連接
DNA連接
酶作用后獲得重組質(zhì)粒。為了擴增重組質(zhì)粒,需將其轉入經(jīng)
氯化鈣
氯化鈣
處理過的
感受
感受
態(tài)的大腸桿菌中。
(2)為了篩選出轉入了重組質(zhì)粒的大腸桿菌,應在篩選平板培養(yǎng)基中添加
四環(huán)素
四環(huán)素
。平板上長出的菌落,常用PCR鑒定,所用的引物組成為圖2中的
引物甲和引物丙
引物甲和引物丙
。
(3)若BamHI酶切的DNA末端與BclI酶切的DNA末端連接,連接部位的6個堿基對序列為
,對于該部位,這兩種酶
都不能
都不能
(填“都能”、“都不能”或“只有一種能”)切開。
(4)若用Sau3AI切圖1質(zhì)粒最多可能獲得
7
7
種大小不同的DNA片段。