丙肝病毒（HCV）是一種RNA病毒，對HCV感染的診斷步驟是：首先進行抗HCV抗體檢測，若檢測結果呈陽性，則還需要進行HCV核酸檢測。HCV 融合抗原可用于制作第三代HCV抗體檢測試劑?；卮鹣铝袉栴}：
（1）將得到的HCV的多個抗原基因首尾相連，在同一啟動子、終止子等的調(diào)控之下，構成融合基因，進而構建融合抗原重組質(zhì)粒。構建融合抗原重組質(zhì)粒的過程中，需要用到

限制酶和DNA連接

限制酶和DNA連接

酶。啟動子是RNA聚合酶識別和結合的部位，能驅動

融合基因轉錄出mRNA

融合基因轉錄出mRNA

。
（2）用重組質(zhì)粒轉化大腸桿菌感受態(tài)細胞，用含硫酸卡那霉素的培養(yǎng)基篩選出能生長的菌落，從而得到能產(chǎn)生HCV融合抗原的工程菌。用

Ca²⁺（或CaCl₂）

Ca²⁺（或CaCl₂）

處理大腸桿菌可得到感受態(tài)細胞，受體大腸桿菌細胞

不含有

不含有

（填“含有”或“不含有”）硫酸卡那霉素抗性基因。
（3）進行HCV核酸檢測時，需要用到一對HCV特異性引物和一種HCV特異性熒光探針，需要的酶有

逆轉錄酶

逆轉錄酶

和耐熱DNA聚合酶，需要的原料是

四種脫氧核苷酸

四種脫氧核苷酸

；檢測過程是先將RNA合成cDNA，再通過PCR法擴增DNA，實時監(jiān)測擴增全過程，從而檢測出HCV-RNA。
（4）某人體內(nèi)HCV抗體檢測結果呈陽性，但進行HCV核酸檢測時結果呈陰性，原因是

其感染HCV后通過免疫反應已將HCV清除，但體內(nèi)存在抗HCV的抗體

其感染HCV后通過免疫反應已將HCV清除，但體內(nèi)存在抗HCV的抗體

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