胰島素作為治療糖尿病的特效藥，市場潛力巨大，科學家利用轉基因技術獲得轉入胰島素基因的大腸桿菌，通過發(fā)酵工程，實現胰島素的大量生產。圖1表示人胰島素基因與引物位置、限制酶作用位點，圖2表示所用質粒的結構。
據圖回答以下問題：
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（1）若要擴增出胰島素基因并用于表達載體的構建，應選擇的引物是 44和 55。若要得到可用于構建表達載體的目的基因，至少經過 33次循環(huán)。
（2）構建基因表達載體時，最好選擇限制酶 BamHI和HindⅢBamHI和HindⅢ，原因是 既能防止質粒自身環(huán)化，又可以保證目的基因正確連接在質粒上既能防止質粒自身環(huán)化，又可以保證目的基因正確連接在質粒上。
（3）將重組質粒導入大腸桿菌時，需用 Ca2+Ca2+處理大腸桿菌，其目的是 使微生物細胞處于感受態(tài)，便于從外界環(huán)境吸收DNA分子使微生物細胞處于感受態(tài)，便于從外界環(huán)境吸收DNA分子。
（4）為了將成功導入重組質粒的大腸桿菌篩選出來，甲同學在加入氨芐青霉素的培養(yǎng)基中進行接種，結果如圖3：
該同學采用的接種方法是 稀釋涂布平板法稀釋涂布平板法。乙同學認為該結果得到的菌落并不都是成功導入重組質粒的大腸桿菌，你認為乙同學判斷的理由是 導入普通質粒質粒的大腸桿菌也能在含有氨芐青霉素的培養(yǎng)基上生長導入普通質粒質粒的大腸桿菌也能在含有氨芐青霉素的培養(yǎng)基上生長。
請在甲同學實驗結果的基礎上提出一種思路，將導入重組質粒的大腸桿菌篩選出來：采用影印法，用無菌絨布將甲的實驗結果影印到一個含有四環(huán)素的培養(yǎng)基B中，在甲的實驗結果中找出培養(yǎng)基B中不能生存的菌落采用影印法，用無菌絨布將甲的實驗結果影印到一個含有四環(huán)素的培養(yǎng)基B中，在甲的實驗結果中找出培養(yǎng)基B中不能生存的菌落。
【答案】4；5；3；BamHI和HindⅢ；既能防止質粒自身環(huán)化，又可以保證目的基因正確連接在質粒上；Ca2+；使微生物細胞處于感受態(tài)，便于從外界環(huán)境吸收DNA分子；稀釋涂布平板法；導入普通質粒質粒的大腸桿菌也能在含有氨芐青霉素的培養(yǎng)基上生長；采用影印法，用無菌絨布將甲的實驗結果影印到一個含有四環(huán)素的培養(yǎng)基B中，在甲的實驗結果中找出培養(yǎng)基B中不能生存的菌落
【解答】
【點評】
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發(fā)布：2024/6/18 8:0:10組卷：1引用：2難度：0.5
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3．幾丁質是許多真菌細胞壁的重要成分，幾丁質酶可催化幾丁質水解。通過基因工程將幾丁質酶基因轉入植物體內，可增強其抗真菌病的能力。回答下列問題：
（1）基因工程中所用的目的基因可以人工合成，也可以從基因文庫中獲得?；蛭膸彀?和。
（2）生物體細胞內的DNA復制開始時，解開DNA雙鏈的酶是。在體外利用PCR技術擴增目的基因時，使反應體系中的模板DNA解鏈為單鏈的條件是。上述兩個解鏈過程的共同點是破壞了DNA雙鏈分子中的。
（3）DNA連接酶是將兩個DNA片段連接起來的酶，常見的有和，其中既能連接黏性末端又能連接平末端的是。當幾丁質酶基因和質粒載體連接時，DNA連接酶催化形成的化學鍵是。
（4）提取RNA時，提取液中需添加RNA酶抑制劑，其目的是。
（5）若獲得的轉基因植株（幾丁質酶基因已經整合到植物的基因組中）抗真菌病的能力沒有提高，根據中心法則分析，其可能的原因是。發(fā)布：2025/1/5 8:0:1組卷：2引用：2難度：0.6