真核基因的轉(zhuǎn)錄激活因子是兩種相對獨立的蛋白質(zhì)BD和AD組成的復(fù)合物，BD負責(zé)識別基因上游特定的DNA序列并與之結(jié)合（不同基因的BD不同），AD負責(zé)活化轉(zhuǎn)錄過程，兩者單獨作用時都不能啟動轉(zhuǎn)錄。在科學(xué)研究中，往往利用該原理判斷兩種蛋白質(zhì)能否相互作用。具 體過程為：讓BD基因與誘餌蛋白基因融合，讓AD基因與待測蛋白基因融合，并讓它們在酵母菌中表達出相應(yīng)的融合蛋白，若誘餌蛋白與待測蛋白可以相互作用，則AD和BD就能充分接近形成 復(fù)合物，并啟動標記基因的表達。具體過程如圖
（1）構(gòu)建重組質(zhì)粒甲時使用雙酶切可以有效防止目的基因與質(zhì)粒 自身環(huán)化、反向連接自身環(huán)化、反向連接；用EcoRⅠ和SalⅠ雙酶切后，檢測樣品1、2中是否含有重組質(zhì)粒乙，電泳結(jié)果為圖2，其中 11號樣品為成功插入AD-待測蛋白基因的重組質(zhì)粒。
（2）質(zhì)粒導(dǎo)入前，Y2H酵母菌母液需用無菌的Ca2+處理，推測其目的是 使Y2H酵母菌細胞處于一種能吸收周圍環(huán)境中DNA的生理狀態(tài)使Y2H酵母菌細胞處于一種能吸收周圍環(huán)境中DNA的生理狀態(tài)。與原核細胞相比，由于酵母菌 有內(nèi)質(zhì)網(wǎng)和高爾基體對蛋白質(zhì)進行加工有內(nèi)質(zhì)網(wǎng)和高爾基體對蛋白質(zhì)進行加工，故蛋白質(zhì)的空間構(gòu)象不受影響，這也是選擇其作為受體細胞的原因之一。
（3）野生型Y2H酵母菌缺乏His3（組氨酸合成基因）和Mell（半乳糖苷酶合成基因），故可將這兩種基因作為標記基因?qū)隮2H酵母菌將其制備成受體菌，來判斷誘餌蛋白與待測蛋白能否相互作用。（已知在培養(yǎng)基中含有X-gal的情況下，半乳糖苷酶的分泌可使酵母菌落呈藍色）。將重組質(zhì)粒甲和乙導(dǎo)入受體菌后，若受體菌菌落在不含組氨酸的平板上能存活且在含有X-gal 的平板上呈現(xiàn)藍色，則說明誘餌蛋白和待測蛋白能相互作用，理由是 誘餌蛋白與待測蛋白可以相互作用，則AD和BD就能充分接近形成復(fù)合物，并啟動兩種標記基因表達誘餌蛋白與待測蛋白可以相互作用，則AD和BD就能充分接近形成復(fù)合物，并啟動兩種標記基因表達。
【考點】基因工程的操作過程綜合．
【答案】自身環(huán)化、反向連接；1；使Y2H酵母菌細胞處于一種能吸收周圍環(huán)境中DNA的生理狀態(tài)；有內(nèi)質(zhì)網(wǎng)和高爾基體對蛋白質(zhì)進行加工；誘餌蛋白與待測蛋白可以相互作用，則AD和BD就能充分接近形成復(fù)合物，并啟動兩種標記基因表達
【解答】
【點評】
聲明：本試題解析著作權(quán)屬菁優(yōu)網(wǎng)所有，未經(jīng)書面同意，不得復(fù)制發(fā)布。
發(fā)布：2024/4/20 14:35:0組卷：6引用：1難度：0.6
相似題
-
1．基因工程技術(shù)又稱為DNA重組技術(shù)，回答相關(guān)問題：
（1）在基因工程中，獲取目的基因主要有兩大途徑，即和從中分離．
（2）利用某植物的成熟葉片為材料，同時構(gòu)建cDNA文庫和基因組文庫，兩個文庫相比，cDNA文庫中含有的基因數(shù)目比基因組文庫中的少，其原因是．
（3）在基因表達載體中，啟動子是聚合酶識別并結(jié)合的部位．若采用原核生物作為基因表達載體的受體細胞，最常用的原核生物是．
（4）將目的基因?qū)胫参锛毎麜r，采用最多的方法是法．發(fā)布：2024/12/29 8:0:2組卷：2引用：1難度：0.3 -
2．科研人員利用大腸桿菌構(gòu)建了抗蟲基因文庫。最新研究發(fā)現(xiàn)漏斗蜘蛛中的AH基因控制合成的毒素肽具有顯著的殺蟲效果，現(xiàn)以p-B質(zhì)粒為載體，構(gòu)建 AH基因的cDNA文庫。圖1表示p-B質(zhì)粒，其中Cm/表示氯霉素抗性基因，cdB 基因表達產(chǎn)物能抑制大腸桿菌 DNA 復(fù)制。圖中箭頭表示相關(guān)限制酶的酶切位點，且不同種限制酶識別序列不同，其中AiuI、XbaI、SspI和MfeⅠ識別的堿基序列和酶切位點分別是 AG'CT、T'CTAGA、AAT'ATT、C'AATTG。請分析并回答下列問題：
（1）為獲得AH基因的cDNA，先要從漏斗蜘蛛毒素肽分泌細胞中提取，再通過合成出AH基因的cDNA。若從漏斗蜘蛛其他組織細胞提取，則難以成功，原因是。
（2）若已知AH基因的cDNA兩端部分序列為：5'-AACTATGCGC……CGTAGCCTCT-3'，請寫出PCR擴增該cDNA時的兩個引物對應(yīng)的局部序列（前10個堿基序列），并標明5'和3'端：，。一個初始雙鏈cDNA經(jīng)四輪循環(huán)后，共消耗這兩種引物的數(shù)量為個。
（3）利用圖中的質(zhì)粒和AH基因構(gòu)建重組質(zhì)粒時，宜選用限制酶雙酶切質(zhì)粒，再選用限制酶切割目的基因，將切割后獲得的DNA片段混合，經(jīng)DNA連接酶處理后，再與大腸桿菌混合培養(yǎng)，在含有適量氯霉素的培養(yǎng)基中添加適量冷的，以促進轉(zhuǎn)化。
（4）經(jīng)上述處理培養(yǎng)后，其中能繁殖的大腸桿菌中應(yīng)含有的質(zhì)粒是，原因是。發(fā)布：2024/12/29 8:0:2組卷：8引用：1難度：0.6 -
3．基因治療是指將外源正常基因?qū)氚屑毎?，以糾正或補償因基因缺陷和異常引起的疾病，以達到治療的目的．干擾素基因缺失的小鼠不能產(chǎn)生成熟淋巴細胞，科研人員利用胚胎干細胞（ES細胞）對干擾素基因缺失的小鼠進行了基因治療．請回答：
（1）為使干擾素基因在小鼠細胞中高效表達，需要把來自cDNA文庫的干擾素基因片段正確插入基因表達載體的和之間．
（2）將干擾素基因?qū)隕S細胞的方法是，采用可以鑒定目的基因是否插入到受體細胞染色體DNA分子上，再將能正常表達干擾素的細胞轉(zhuǎn)入到小鼠體內(nèi)，這種治療方法稱為．導(dǎo)入ES細胞而不是導(dǎo)入上皮細胞是因為ES細胞在功能上具有．
（3）干擾素基因缺失的小鼠易患某種細菌導(dǎo)致的肺炎，引起這種現(xiàn)象的原因是小鼠缺少成熟的淋巴細胞，降低了小鼠免疫系統(tǒng)的功能．
（4）用于基因治療的基因有三類，一類是把正?；?qū)胗谢蛉毕莸募毎?，以表達出正常性狀來治療，第二類是反義基因，即通過產(chǎn)生的mRNA分子與病變基因產(chǎn)生的進行互補結(jié)合，來阻斷非正常蛋白質(zhì)的合成；第三類是編碼可以殺死癌細胞的蛋白酶基因．發(fā)布：2024/12/29 8:0:2組卷：24引用：2難度：0.5
把好題分享給你的好友吧~~