引起人類產(chǎn)生埃博拉出血熱的埃博拉病毒（EBOV），是一種單鏈RNA病毒，某研究團(tuán)隊(duì)利用其跨膜表面糖蛋白（GP），以重組腺病毒為載體研發(fā)了埃博拉疫苗。腺病毒是一種DNA病毒，腺病毒載體包括骨架質(zhì)粒（攜帶腺病毒的主要功能基因）和穿梭質(zhì)粒（能轉(zhuǎn)移外源基因到骨架質(zhì)粒上）。如圖為重組埃博拉疫苗制作的部分流程示意圖，已知四種限制性核酸內(nèi)切酶KpnⅠ、BamHⅠ、NheⅠ、BgⅢ的識別序列和酶切位點(diǎn)分別為：GGTAC^↓C、G^↓GATCC、G^↓CTAGC、A^↓GATCT．請回答下列問題：

（1）為了判斷是否感染EBOV，利用探針對疑似患者進(jìn)行核酸檢測，其檢測方法采用了

分子雜交

分子雜交

技術(shù)。為了提高檢測的準(zhǔn)確性，需從EBOV核酸中選取具有

特異性

特異性

的序列作為探針設(shè)計(jì)的模板。
（2）從EBOV基因組中分離出的GP基因不能直接與穿梭質(zhì)粒重組，其原因是

GP基因是單鏈RNA結(jié)構(gòu)

GP基因是單鏈RNA結(jié)構(gòu)

；而過程①獲得的GP基因片段因兩端缺乏

相應(yīng)的限制酶酶切位點(diǎn)

相應(yīng)的限制酶酶切位點(diǎn)

也不能直接與穿梭質(zhì)粒重組。研究人員在過程①獲得的GP基因片段下游添加了含“-AGATCT-”的序列，則需在其上游添加包含有

-GGTACC-

-GGTACC-

序列的片段，以便與穿梭質(zhì)粒重組，且能避免GP基因反向連接。
（3）實(shí)際操作中需利用限制酶將環(huán)狀的重組穿梭質(zhì)粒切成兩個(gè)核苷酸片段，則切割前后含有的游離磷酸基團(tuán)數(shù)目變化為

0→4

0→4

。將含GP基因的核苷酸片段與骨架質(zhì)粒通過過程④完成重組，再在含

卡那霉素

卡那霉素

的平板上培養(yǎng)，篩選出含重組骨架質(zhì)粒的陽性菌。
（4）過程⑤中，利用脂質(zhì)體將重組骨架質(zhì)粒導(dǎo)入到人的胚胎腎細(xì)胞HEK293中，其運(yùn)用的原理是

膜的流動(dòng)性

膜的流動(dòng)性

，再將成功導(dǎo)入的細(xì)胞HK293培養(yǎng)一段時(shí)間，獲得大量重組腺病毒，為疫苗的進(jìn)一步研究奠定基礎(chǔ)。