新冠病毒是一種單鏈RNA病毒,常用“熒光RT-PCR技術(shù)”進(jìn)行檢測(cè),方法是取檢測(cè)者的mRNA逆轉(zhuǎn)錄出cDNA,并大量擴(kuò)增,時(shí),用熒光標(biāo)記的新冠病毒核酸探針來(lái)檢測(cè)PCR產(chǎn)物中是否含有新冠病毒的cDNA.請(qǐng)回答下列問(wèn)題:
(1)“熒光RT-PCR技術(shù)”所用的試劑盒中通常都應(yīng)該含有:逆轉(zhuǎn)錄酶逆轉(zhuǎn)錄酶、熱穩(wěn)定性DNA聚合酶(Taq酶)熱穩(wěn)定性DNA聚合酶(Taq酶)、熒光標(biāo)記的核酸探針、引物、dNTP、緩沖體系。
(2)如果要同時(shí)擴(kuò)增兩種基因,則試劑盒中的引物應(yīng)該有44種。如圖1為新冠病毒的“ORFlab基因”對(duì)應(yīng)的cDNA片段結(jié)構(gòu)示意圖,則與之對(duì)應(yīng)的引物結(jié)合的部位應(yīng)該是圖中的4、14、1(子鏈延伸方向?yàn)槠渥陨淼?′→3′,用圖中數(shù)字作答)。若已知該基因的引物Ⅰ,能否依據(jù)其堿基序列設(shè)計(jì)出另一種引物Ⅱ?不能不能,理由是兩段引物的堿基序列沒(méi)有相關(guān)性(既不相同,也不互補(bǔ))兩段引物的堿基序列沒(méi)有相關(guān)性(既不相同,也不互補(bǔ))。
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(3)在檢測(cè)過(guò)程中,隨著PCR的進(jìn)行,反應(yīng)產(chǎn)物不斷累積,“雜交雙鏈”熒光信號(hào)的強(qiáng)度也等比例增加??赏ㄟ^(guò)熒光強(qiáng)度的變化監(jiān)測(cè)產(chǎn)物量的變化從而得到一條熒光擴(kuò)增曲線圖(如圖2)。
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①“平臺(tái)期”出現(xiàn)的最可能的原因是試劑盒中的原料、引物和探針數(shù)量一定,超出一定的循環(huán)數(shù)后,熒光標(biāo)記的“雜交雙鏈”不再增加試劑盒中的原料、引物和探針數(shù)量一定,超出一定的循環(huán)數(shù)后,熒光標(biāo)記的“雜交雙鏈”不再增加。
②理論上,在檢測(cè)過(guò)程中,有熒光標(biāo)記的“雜交雙鏈”出現(xiàn),則說(shuō)明檢測(cè)結(jié)果呈陽(yáng)陽(yáng)(填“陰”或“陽(yáng)”)性,但為了保證檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確性,一般要達(dá)到或超過(guò)閾值時(shí)才確診?,F(xiàn)有兩個(gè)待檢樣本,檢測(cè)時(shí)都出現(xiàn)了上述形態(tài)的曲線,但甲的a點(diǎn)比乙的a點(diǎn)明顯左移。請(qǐng)給這種結(jié)果做出科學(xué)合理的解釋?zhuān)ㄔ噭┖泻细袂艺?,操作過(guò)程規(guī)范且準(zhǔn)確):甲樣本中的新冠病毒含量更高達(dá)到閾值所需的循環(huán)數(shù)更少甲樣本中的新冠病毒含量更高達(dá)到閾值所需的循環(huán)數(shù)更少。
【考點(diǎn)】DNA片段的擴(kuò)增與電泳鑒定.
【答案】逆轉(zhuǎn)錄酶;熱穩(wěn)定性DNA聚合酶(Taq酶);4;4、1;不能;兩段引物的堿基序列沒(méi)有相關(guān)性(既不相同,也不互補(bǔ));試劑盒中的原料、引物和探針數(shù)量一定,超出一定的循環(huán)數(shù)后,熒光標(biāo)記的“雜交雙鏈”不再增加;陽(yáng);甲樣本中的新冠病毒含量更高達(dá)到閾值所需的循環(huán)數(shù)更少
【解答】
【點(diǎn)評(píng)】
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發(fā)布:2024/4/20 14:35:0組卷:53引用:3難度:0.7
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發(fā)布:2024/12/30 23:30:2組卷:7引用:2難度:0.6 -
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