野生茄子具有耐鹽基因StP5CS。研究人員擴增StP5CS 基因并雙酶切該基因和改造后的中間載體pCAMBIA1301，經(jīng)DNA 連接酶連接酶切產(chǎn)物，最終得到下圖1所示的植物表達載體pCAMBIA1301-StP5CS。將該植物表達載體導入植物細胞進而獲得了耐鹽植株?；卮鹣铝袉栴}：
（1）提取茄子幼嫩葉片的總RNA，在 逆轉(zhuǎn)錄酶逆轉(zhuǎn)錄酶 的催化下合成cDNA，再通過PCR技術擴增StP5CS基因。PCR利用 DNA雙鏈復制DNA雙鏈復制 的原理。
（2）擴增StP5CS 基因的上游引物為 ZHPs：5'-CACATTTCTGCTCCTACATT-3'，下游引物為ZHPa：5'-CTTCCTAAATACACAACTGGAT-3'，兩種引物中C+G 的比例保持一致主要是為了保證 引物與單鏈相應互補序列結合（復性）過程溫度相近，引物與單鏈相應互補序列結合（復性）過程溫度相近，。StP5CS基因PCR擴增的每次循環(huán)分為3步，在循環(huán)前常要進行一次94℃、5min預變性，其目的是 增加模板DNA徹底變性的概率（使模板DNA充分變性）增加模板DNA徹底變性的概率（使模板DNA充分變性）。
（3）構建耐鹽基因StP5CS表達載體時，用限制酶BamHⅠ和SmaⅠ切割質(zhì)粒pCAMBIA1301，15 min后需將溫度從36℃升高至65℃左右并保溫20min,目的是 使限制酶失活使限制酶失活，從而終止酶切反應。mRNA合成方向是5′→3′，圖2是StP5CS基因示意圖，為使其能正確插入表達載體并成功表達，則圖中P處的堿基序列應為5'-CCCGGGCCCGGG-3'。
（4）若將該表達載體導入柑橘細胞中，常用 農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法，表達載體上的Ori可以保證其在柑橘細胞中能 自我復制自我復制。
【考點】基因工程的操作過程綜合；DNA片段的擴增與電泳鑒定．
【答案】逆轉(zhuǎn)錄酶；DNA雙鏈復制；引物與單鏈相應互補序列結合（復性）過程溫度相近，；增加模板DNA徹底變性的概率（使模板DNA充分變性）；使限制酶失活；CCCGGG；農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化；自我復制
【解答】
【點評】
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發(fā)布：2024/5/10 8:0:9組卷：5引用：3難度：0.5
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1．下列有關基因工程技術和蛋白質(zhì)工程技術敘述正確的是（ ?。?/h2>
發(fā)布：2025/1/5 8:0:1組卷：6引用：1難度：0.7 -
2．幾丁質(zhì)是許多真菌細胞壁的重要成分，幾丁質(zhì)酶可催化幾丁質(zhì)水解。通過基因工程將幾丁質(zhì)酶基因轉(zhuǎn)入植物體內(nèi)，可增強其抗真菌病的能力?；卮鹣铝袉栴}：
（1）基因工程中所用的目的基因可以人工合成，也可以從基因文庫中獲得?；蛭膸彀?和。
（2）生物體細胞內(nèi)的DNA復制開始時，解開DNA雙鏈的酶是。在體外利用PCR技術擴增目的基因時，使反應體系中的模板DNA解鏈為單鏈的條件是。上述兩個解鏈過程的共同點是破壞了DNA雙鏈分子中的。
（3）DNA連接酶是將兩個DNA片段連接起來的酶，常見的有和，其中既能連接黏性末端又能連接平末端的是。當幾丁質(zhì)酶基因和質(zhì)粒載體連接時，DNA連接酶催化形成的化學鍵是。
（4）提取RNA時，提取液中需添加RNA酶抑制劑，其目的是。
（5）若獲得的轉(zhuǎn)基因植株（幾丁質(zhì)酶基因已經(jīng)整合到植物的基因組中）抗真菌病的能力沒有提高，根據(jù)中心法則分析，其可能的原因是。發(fā)布：2025/1/5 8:0:1組卷：2引用：2難度：0.6 -
3．下列有關基因工程的敘述，正確的是（ ?。?/h2>
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