普通棉花中含β甘露糖苷酶基因（ChMmaA2），能在纖維細胞中特異性表達，產(chǎn)生的β甘露糖苷酶催化半纖維素降解，棉纖維長度變短。為了培育新的棉花品種，科研人員構(gòu)建了反義GhMnaA2基因表達載體，利用農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法導入棉花細胞，成功獲得轉(zhuǎn)基因棉花品種，具體過程如圖。請分析回答：

（1）纖維細胞E6啟動子的元素組成為

C、H、O、N、P

C、H、O、N、P

，基因表達載體除了圖示組成外，至少還有

復制原點、終止子、標記基因

復制原點、終止子、標記基因

等（至少答兩個），不能使用質(zhì)粒1中花椰菜病毒啟動子的原因是

纖維細胞中的RNA聚合酶不能識別和結(jié)合花椰菜病毒啟動子，反義GhMnaA2不能轉(zhuǎn)錄產(chǎn)生mRNA

纖維細胞中的RNA聚合酶不能識別和結(jié)合花椰菜病毒啟動子，反義GhMnaA2不能轉(zhuǎn)錄產(chǎn)生mRNA

。
（2）PCR技術(shù)擴增β-甘露糖苷酶基因需要根據(jù)

GhMnaA2兩端部分核苷酸序列

GhMnaA2兩端部分核苷酸序列

設(shè)計特異性引物序列，假設(shè)開始時模板DNA數(shù)量為m個，PCR擴增5個循環(huán)，理論上需要的引物數(shù)量

62m

62m

，只含目的基因的片段數(shù)量為

22m

22m

。為保證ChMnaA2能插入到質(zhì)粒2中，還需要在引物的

5′

5′

端添加限制酶識別序列。
（3）為什么不能用GhMnaA2探針進行DNA分子雜交來鑒定基因表達載體是否導入棉花細胞？

因為棉花細胞中本來就有GhMnaA2，不管是否導入都能與該探針發(fā)生堿基互補配對

因為棉花細胞中本來就有GhMnaA2，不管是否導入都能與該探針發(fā)生堿基互補配對

。
（4）③過程中用酶切法可鑒定正、反義表達載體。用SmaⅠ酶和NotⅠ酶切割正義基因表達載體獲得0.1kb、3.2kb、5.8kb、8.6kb四種長度的DNA片段，則用NotI酶切反義基因表達載體獲得DNA片段的長度應(yīng)是

5.9kb

5.9kb

和

11.8kb

11.8kb

。
（5）導入細胞內(nèi)的反義GhMnaA2能阻止β-甘露糖甘酶合成，使棉纖維變長的原理是

反義GhMnaA2轉(zhuǎn)錄的mRNA能與棉花細胞內(nèi)的GhMnaA2轉(zhuǎn)錄的mRNA互補配對，從而抑制基因的表達（翻譯）

反義GhMnaA2轉(zhuǎn)錄的mRNA能與棉花細胞內(nèi)的GhMnaA2轉(zhuǎn)錄的mRNA互補配對，從而抑制基因的表達（翻譯）

。