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大麗輪枝菌（一種絲狀真菌）是引起棉花黃萎病的主要病原菌。為觀察大麗輪枝菌對(duì)棉花根侵染路徑，研究人員利用綠色熒光蛋白基因（sGFP）轉(zhuǎn)染大麗輪枝菌，培育出表達(dá)綠色熒光蛋白的轉(zhuǎn)基因菌株，主要過程如圖（圖中a鏈和b鏈分別是相應(yīng)基因轉(zhuǎn)錄模板鏈）。分析回答：
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（1）研究者將獲得的sGFP基因利用PCR技術(shù)擴(kuò)增，該過程需設(shè)計(jì)合適的引物。設(shè)計(jì)引物時(shí)需已知
sGFP基因兩端的核苷酸序列
sGFP基因兩端的核苷酸序列
，為便于進(jìn)行后續(xù)操作還需在引物中添加限制酶的識(shí)別序列，圖中b鏈的黏性末端堿基序列（5'→3'）為
AGCT
AGCT
。PCR擴(kuò)增時(shí)需要設(shè)計(jì)2種引物，其原因是
基因由兩條反向平行的鏈構(gòu)成，且都作模板，其上堿基序列不同
基因由兩條反向平行的鏈構(gòu)成，且都作模板，其上堿基序列不同
。PCR技術(shù)操作步驟中包括兩次升溫和一次降溫，其中降溫的目的是
使引物和模板鏈結(jié)合
使引物和模板鏈結(jié)合
。
（2）利用圖示目的基因和質(zhì)粒構(gòu)建重組質(zhì)粒，選用限制酶HindⅢ和BamHⅠ切割，優(yōu)點(diǎn)是
產(chǎn)生不同的黏性末端，防止目的基因和載體反向連接，自身環(huán)化
產(chǎn)生不同的黏性末端，防止目的基因和載體反向連接，自身環(huán)化
。
（3過程③要初步篩選出導(dǎo)入重組質(zhì)粒的農(nóng)桿菌，要在含有
潮霉素
潮霉素
的培養(yǎng)基中進(jìn)行培養(yǎng)。
（4）用sGFP基因作為探針可檢測(cè)轉(zhuǎn)基因大麗輪枝菌中是否含有
sGFP基因，sGFP基因的mRNA
sGFP基因，sGFP基因的mRNA
，最終通過檢測(cè)
大麗輪枝菌菌絲細(xì)胞中綠色熒光強(qiáng)度
大麗輪枝菌菌絲細(xì)胞中綠色熒光強(qiáng)度
篩選出綠色熒光蛋白旺盛表達(dá)的大麗輪枝菌。

【考點(diǎn)】基因工程的操作過程綜合．
【答案】sGFP基因兩端的核苷酸序列；AGCT；基因由兩條反向平行的鏈構(gòu)成，且都作模板，其上堿基序列不同；使引物和模板鏈結(jié)合；產(chǎn)生不同的黏性末端，防止目的基因和載體反向連接，自身環(huán)化；潮霉素；sGFP基因，sGFP基因的mRNA；大麗輪枝菌菌絲細(xì)胞中綠色熒光強(qiáng)度
【解答】
【點(diǎn)評(píng)】
聲明：本試題解析著作權(quán)屬菁優(yōu)網(wǎng)所有，未經(jīng)書面同意，不得復(fù)制發(fā)布。
發(fā)布：2024/4/20 14:35:0組卷：23引用：2難度：0.5
相似題

  • 1．某科研小組從土壤菌株A、B中分離到同源性為93%的Bt1抗蟲基因和Bt2抗蟲基因的編碼序列，并運(yùn)用交錯(cuò)延伸PCR技術(shù)獲得了抗蟲性能強(qiáng)的重組B基因，轉(zhuǎn)入煙草獲得成功，過程如圖所示。下列選項(xiàng)正確的是（　　）
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    注：①交錯(cuò)延伸PCR：基因Bt1和Bt2均作為模板，所需引物相同，圖中僅示其中一條鏈的延伸情況。②啟動(dòng)子Pr1a可在煙草葉肉細(xì)胞中特異性啟動(dòng)基因的轉(zhuǎn)錄。③圖中生長(zhǎng)素合成酶基因是通過成熟mRNA逆轉(zhuǎn)錄獲得的DNA片段，可使植物細(xì)胞合成生長(zhǎng)素。

    發(fā)布：2024/11/16 21:0:1組卷：36引用：2難度：0.5

  • 2．基因工程在農(nóng)牧業(yè)、醫(yī)藥衛(wèi)生和食品工業(yè)等多方面的應(yīng)用發(fā)展迅速，如圖表示利用基因工程技術(shù)生產(chǎn)人血清白蛋白的兩條途徑。下列敘述錯(cuò)誤的是（　?。?br />菁優(yōu)網(wǎng)

    發(fā)布：2024/11/14 7:0:1組卷：62引用：7難度：0.7

  • 3．經(jīng)由食物攝取過量生物胺會(huì)引起頭痛、胃腸道不適和過敏等不良反應(yīng)，嚴(yán)重時(shí)甚至危及生命，因此必須對(duì)食品中生物胺的含量進(jìn)行減控。微生物來源的多銅氧化酶（MCO）能高效分解生物胺，基于基因工程規(guī)?；a(chǎn)重組MCO在食品工業(yè)中具有廣泛用途。我國(guó)科研人員采用PCR技術(shù)獲得發(fā)酵乳桿菌的MCO基因，然后轉(zhuǎn)入大腸桿菌中實(shí)現(xiàn)了高效表達(dá)。
    （1）通過上述基因工程技術(shù)獲取目標(biāo)產(chǎn)物，涉及如下步驟，則合理的操作步驟排序是
     
    （填寫下列編號(hào)）。
    ①篩選和鑒定含目的基因的受體細(xì)胞
    ②選用合適的方法獲取目的基因
    ③借助發(fā)酵工程規(guī)?；a(chǎn)目標(biāo)蛋白
    ④目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞
    ⑤目的基因和運(yùn)載體重組構(gòu)建表達(dá)載體
    （2）在PCR過程中，引物的功能是
     
    。
    A．啟動(dòng)DNA復(fù)制
    B．規(guī)定擴(kuò)增區(qū)間
    C．解旋DNA雙鏈
    D．充當(dāng)復(fù)制模板
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    （3）為獲得目的基因MCO（圖甲灰色表示的序列），正確設(shè)計(jì)的PCR引物應(yīng)為圖甲中的
     
    。
    （4）獲取目的基因后，需要和載體重組導(dǎo)入受體細(xì)胞。載體的化學(xué)本質(zhì)是
     
    （填DNA或RNA/DNA或RNA）。
    （5）在常規(guī)PCR的每一輪擴(kuò)增反應(yīng)中，溫度隨時(shí)間的變化順序是圖乙中的
     
    。
    （6）若目的基因MCO經(jīng)限制酶切開后呈圖丙中圖2所示的末端，那么載體質(zhì)粒pCLY15（圖丙中圖1）需用
     
    和
     
    切開，才能與MCO片段高效連接。
    （7）下列實(shí)驗(yàn)操作中，能有效鑒別載體質(zhì)粒pCLY15空載還是“滿載”的是
     
    。
    A．從抗藥性克隆中提取質(zhì)粒DNA，用合適的限制酶切割
    B．在選擇培養(yǎng)基中添加X-gal試劑，以克隆的顏色進(jìn)行鑒別
    C．從抗藥性克隆中提取質(zhì)粒DNA，以此為模板進(jìn)行PCR檢測(cè)
    D．將Ap抗性克隆轉(zhuǎn)移至含Tc（四環(huán)素）的平板上，根據(jù)大腸桿菌生長(zhǎng)與否加以鑒別

    發(fā)布：2024/11/14 4:30:2組卷：29引用：3難度：0.5
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