大麗輪枝菌（一種絲狀真菌）是引起棉花黃萎病的主要病原菌。為觀察大麗輪枝菌對(duì)棉花根侵染路徑，研究人員利用綠色熒光蛋白基因（sGFP）轉(zhuǎn)染大麗輪枝菌，培育出表達(dá)綠色熒光蛋白的轉(zhuǎn)基因菌株，主要過(guò)程如圖（圖中a鏈和b鏈分別是相應(yīng)基因轉(zhuǎn)錄模板鏈）。分析回答：
（1）研究者將獲得的sGFP基因利用PCR技術(shù)擴(kuò)增，該過(guò)程需設(shè)計(jì)合適的引物。設(shè)計(jì)引物時(shí)需已知sGFP基因兩端的核苷酸序列sGFP基因兩端的核苷酸序列，為便于進(jìn)行后續(xù)操作還需在引物中添加限制酶的識(shí)別序列，圖中b鏈的黏性末端堿基序列（5'→3'）為AGCTAGCT。PCR擴(kuò)增時(shí)需要設(shè)計(jì)2種引物，其原因是基因由兩條反向平行的鏈構(gòu)成，且都作模板，其上堿基序列不同基因由兩條反向平行的鏈構(gòu)成，且都作模板，其上堿基序列不同。PCR技術(shù)操作步驟中包括兩次升溫和一次降溫，其中降溫的目的是使引物和模板鏈結(jié)合使引物和模板鏈結(jié)合。
（2）利用圖示目的基因和質(zhì)粒構(gòu)建重組質(zhì)粒，選用限制酶HindⅢ和BamHⅠ切割，優(yōu)點(diǎn)是產(chǎn)生不同的黏性末端，防止目的基因和載體反向連接，自身環(huán)化產(chǎn)生不同的黏性末端，防止目的基因和載體反向連接，自身環(huán)化。
（3過(guò)程③要初步篩選出導(dǎo)入重組質(zhì)粒的農(nóng)桿菌，要在含有潮霉素潮霉素的培養(yǎng)基中進(jìn)行培養(yǎng)。
（4）用sGFP基因作為探針可檢測(cè)轉(zhuǎn)基因大麗輪枝菌中是否含有sGFP基因，sGFP基因的mRNAsGFP基因，sGFP基因的mRNA，最終通過(guò)檢測(cè)大麗輪枝菌菌絲細(xì)胞中綠色熒光強(qiáng)度大麗輪枝菌菌絲細(xì)胞中綠色熒光強(qiáng)度篩選出綠色熒光蛋白旺盛表達(dá)的大麗輪枝菌。
【考點(diǎn)】基因工程的操作過(guò)程綜合．
【答案】sGFP基因兩端的核苷酸序列；AGCT；基因由兩條反向平行的鏈構(gòu)成，且都作模板，其上堿基序列不同；使引物和模板鏈結(jié)合；產(chǎn)生不同的黏性末端，防止目的基因和載體反向連接，自身環(huán)化；潮霉素；sGFP基因，sGFP基因的mRNA；大麗輪枝菌菌絲細(xì)胞中綠色熒光強(qiáng)度
【解答】
【點(diǎn)評(píng)】
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發(fā)布：2024/4/20 14:35:0組卷：24引用：2難度：0.5
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1．下列有關(guān)基因工程技術(shù)和蛋白質(zhì)工程技術(shù)敘述正確的是（ ）
發(fā)布：2025/1/5 8:0:1組卷：6引用：1難度：0.7 -
2．幾丁質(zhì)是許多真菌細(xì)胞壁的重要成分，幾丁質(zhì)酶可催化幾丁質(zhì)水解。通過(guò)基因工程將幾丁質(zhì)酶基因轉(zhuǎn)入植物體內(nèi)，可增強(qiáng)其抗真菌病的能力。回答下列問(wèn)題：
（1）基因工程中所用的目的基因可以人工合成，也可以從基因文庫(kù)中獲得。基因文庫(kù)包括和。
（2）生物體細(xì)胞內(nèi)的DNA復(fù)制開(kāi)始時(shí)，解開(kāi)DNA雙鏈的酶是。在體外利用PCR技術(shù)擴(kuò)增目的基因時(shí)，使反應(yīng)體系中的模板DNA解鏈為單鏈的條件是。上述兩個(gè)解鏈過(guò)程的共同點(diǎn)是破壞了DNA雙鏈分子中的。
（3）DNA連接酶是將兩個(gè)DNA片段連接起來(lái)的酶，常見(jiàn)的有和，其中既能連接黏性末端又能連接平末端的是。當(dāng)幾丁質(zhì)酶基因和質(zhì)粒載體連接時(shí)，DNA連接酶催化形成的化學(xué)鍵是。
（4）提取RNA時(shí)，提取液中需添加RNA酶抑制劑，其目的是。
（5）若獲得的轉(zhuǎn)基因植株（幾丁質(zhì)酶基因已經(jīng)整合到植物的基因組中）抗真菌病的能力沒(méi)有提高，根據(jù)中心法則分析，其可能的原因是。發(fā)布：2025/1/5 8:0:1組卷：2引用：2難度：0.6 -
3．下列有關(guān)基因工程的敘述，正確的是（ ）
發(fā)布：2024/12/31 5:0:5組卷：3引用：2難度：0.7
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