研究表明，服用α-干擾素在慢性乙肝、丙肝及部分腫瘤的治療中有一定療效。人參是一種名貴藥材，具有較好的滋補(bǔ)作用。限制酶的發(fā)現(xiàn)為DNA的切割和功能基因的獲得創(chuàng)造了條件。限制酶Sau3AⅠ、EcoRⅠ、BamHⅠ的識(shí)別序列及切割位點(diǎn)分別為↓GATC、G↓AATTC、C↓GATCC。含干擾素基因的DNA片段如圖1所示，圖2為科研人員制備能合成干擾素的人參愈傷組織細(xì)胞的流程圖，①～④表示相關(guān)的操作。請(qǐng)回答下列問題：
（1）結(jié)合上圖，在構(gòu)建基因表達(dá)載體時(shí)，為克服目的基因和農(nóng)桿菌Ti質(zhì)粒的自身環(huán)化以及目的基因與質(zhì)粒的任意連接等，應(yīng)選擇用限制酶 EcoRⅠ和BamHⅠEcoRⅠ和BamHⅠ處理含某目的基因的DNA和質(zhì)粒。
（2）DNA連接酶催化目的基因片段與質(zhì)粒載體片段之間形成的化學(xué)鍵是 磷酸二酯鍵磷酸二酯鍵。
（3）圖2操作①常利用PCR技術(shù)獲取和擴(kuò)增干擾素基因，除含有干擾素基因的DNA片段之外，該過程需要提供 4種脫氧核苷酸和耐高溫的DNA聚合酶（dNTP和Taq酶）4種脫氧核苷酸和耐高溫的DNA聚合酶（dNTP和Taq酶）以及與干擾素基因兩端兩條模板鏈結(jié)合的兩種引物。設(shè)計(jì)引物時(shí)，為了保證目的基因與質(zhì)粒順利連接，防止出現(xiàn)自身環(huán)化連接，需要在兩種引物的一端分別加上EcoRⅠ和BamHⅠ的識(shí)別序列 GAATTC和CGATCCGAATTC和CGATCC。
（4）圖2步驟②除EcoRⅠ、BamHⅠ兩種酶外，還需要用 DNA連接DNA連接酶。構(gòu)建的基因表達(dá)載體除含有目的基因片段以外，還必須有 啟動(dòng)子和終止子啟動(dòng)子和終止子，以保證干擾素基因能在人參愈傷組織細(xì)胞中穩(wěn)定存在和表達(dá)。同時(shí)，還應(yīng)含有標(biāo)記基因以便于 篩選含有重組DNA分子的受體細(xì)胞篩選含有重組DNA分子的受體細(xì)胞。
（5）圖2操作④常用 抗原—抗體雜交抗原—抗體雜交技術(shù)檢測干擾素基因是否成功表達(dá)出干擾素。
【考點(diǎn)】基因工程的操作過程綜合．
【答案】EcoRⅠ和BamHⅠ；磷酸二酯鍵；4種脫氧核苷酸和耐高溫的DNA聚合酶（dNTP和Taq酶）；GAATTC和CGATCC；DNA連接；啟動(dòng)子和終止子；篩選含有重組DNA分子的受體細(xì)胞；抗原—抗體雜交
【解答】
【點(diǎn)評(píng)】
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發(fā)布：2024/8/6 8:0:9組卷：28引用：3難度：0.5
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發(fā)布：2024/12/20 5:0:2組卷：35引用：5難度：0.6 -
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（1）獲得轉(zhuǎn)基因抗鹽煙草新品種過程中應(yīng)用的生物技術(shù)有（答出2項(xiàng)）等。
（2）為確保目的基因定向插入了質(zhì)粒，應(yīng)該選擇（填酶）切割目的基因和質(zhì)粒。在培養(yǎng)基中加入（填“氨芐青霉素”或“四環(huán)素”）對(duì)目的基因進(jìn)行篩選。
（3）培育轉(zhuǎn)基因抗鹽煙草新品種的核心工作是圖中過程（填序號(hào)）。過程②③采用的方法是。
（4）⑤過程需要用到等植物激素，在誘導(dǎo)愈傷組織分化成幼苗的過程中，這兩種植物激素的比例會(huì)發(fā)生變化，原因是。發(fā)布：2024/12/20 2:30:1組卷：16引用：5難度：0.5 -
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限制酶 BamHⅠ EcoRⅠ HindⅠ NbeⅠ MunⅠ 識(shí)別序列及切割位點(diǎn) G↓CATCC G↓AATTC A↓AGCTT G↓CTAGC C↓AATTG 
發(fā)布：2024/12/20 3:30:1組卷：6引用：1難度：0.6
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