tPA是一種臨床上用于治療心腦血栓類疾病的藥物,科研人員計(jì)劃用動物乳腺生物反應(yīng)器生產(chǎn)tPA,但tPA并不是乳腺蛋白,因此在動物乳腺中的表達(dá)水平較低。生長激素(GH)可促進(jìn)動物細(xì)胞增殖和乳腺生長發(fā)育及維持泌乳。研究人員通過構(gòu)建具有GH基因和IPA基因的雙轉(zhuǎn)基因小鼠,探究GH能否促進(jìn)外源目的基因tPA的表達(dá)。回答下列問題:
(1)為獲得轉(zhuǎn)基因小鼠,將tPA基因通過 顯微注射顯微注射的方法注入小鼠的 受精卵受精卵中,將發(fā)育成為tPA單轉(zhuǎn)基因個(gè)體;同理將tPA基因和GH基因同時(shí)注入獲得雙轉(zhuǎn)基因小鼠,選擇性別為 雌性雌性的個(gè)體作為后續(xù)研究對象。
(2)剪取轉(zhuǎn)基因小鼠的少量尾尖組織,提取基因組DNA進(jìn)行PCR擴(kuò)增,PCR反應(yīng)體系中需加入特定的引物,引物的作用是 使耐高溫的DNA聚合酶(TaqDNA聚合酶)從引物3'端開始連接脫氧核苷酸使耐高溫的DNA聚合酶(TaqDNA聚合酶)從引物3'端開始連接脫氧核苷酸,擴(kuò)增的產(chǎn)物再經(jīng)過 瓊脂糖凝膠電泳瓊脂糖凝膠電泳技術(shù)來鑒定是否成功。
(3)圖1是兩種基因表達(dá)載體的部分示意圖,圖中CMV代表 乳腺中特異表達(dá)的基因乳腺中特異表達(dá)的基因的啟動子。利用PCR技術(shù)來檢測基因整合情況,若小鼠成功整合了tPA基因,則能擴(kuò)增出多個(gè)大小為 560560bp的DNA片段。圖2中的1和2代表轉(zhuǎn)基因小鼠的兩種檢測結(jié)果,出現(xiàn)第 22種結(jié)果的小鼠為GH/tPA雙轉(zhuǎn)基因小鼠。
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(4)選取處于泌乳期的GH/tPA雙轉(zhuǎn)基因和tPA單轉(zhuǎn)基因小鼠,統(tǒng)計(jì)分析兩種轉(zhuǎn)基因小鼠乳腺中tPA的表達(dá)情況,結(jié)果見下表。結(jié)果證明了 生長激素(GH)能夠促進(jìn)tPA的表達(dá)生長激素(GH)能夠促進(jìn)tPA的表達(dá)。
轉(zhuǎn)基因小鼠tPA表達(dá)情況分析表
tPA單轉(zhuǎn)基因小鼠 | GH/tPA雙轉(zhuǎn)基因小鼠 | |
表達(dá)水平(μg/mL) | 16.3~82.5 | 112~423 |
【答案】顯微注射;受精卵;雌性;使耐高溫的DNA聚合酶(TaqDNA聚合酶)從引物3'端開始連接脫氧核苷酸;瓊脂糖凝膠電泳;乳腺中特異表達(dá)的基因;560;2;生長激素(GH)能夠促進(jìn)tPA的表達(dá)
【解答】
【點(diǎn)評】
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