反硝化細(xì)菌能在無氧環(huán)境中將硝酸鹽轉(zhuǎn)化為氮?dú)猓?NO-3+10e-+12H+→…N2O→N2），在處理工業(yè)污水、治理水體富營養(yǎng)化中具有重要作用?？蒲腥藛T想從一污水處理廠的活性污泥中篩選分離出耐高溫（42℃）的反硝化細(xì)菌（目的菌），用于提升溫度較高的工業(yè)污水的脫氮效率，具體流程如圖1所示（BTB培養(yǎng)基初始pH=6.8，BTB是酸堿指示劑，酸性條件下為黃色，中性條件下為綠色，堿性條件下為藍(lán)色）：
（1）BTB培養(yǎng)基滅菌后待平板凝固后，應(yīng)倒置放在超凈臺上，目的是 防止皿蓋上的水珠落入培養(yǎng)基，避免培養(yǎng)基中的水分過快的揮發(fā)防止皿蓋上的水珠落入培養(yǎng)基，避免培養(yǎng)基中的水分過快的揮發(fā)。在接種前，隨機(jī)取若干滅菌后的空白平板先行培養(yǎng)了一段時間，目的是 檢測培養(yǎng)基平板滅菌是否合格檢測培養(yǎng)基平板滅菌是否合格。
（2）將污泥樣品梯度稀釋后，使用 涂布器涂布器（填工具）將樣液均勻涂布在BTB培養(yǎng)基上，放在 無氧、42℃無氧、42℃環(huán)境中培養(yǎng)2～3天后，挑選周圍顯 藍(lán)藍(lán)色的單菌落在固體培養(yǎng)基上劃線分離，獲得純菌株。
（3）將純菌株接種在液體培養(yǎng)基上培養(yǎng)一段時間，若在培養(yǎng)瓶頂部檢測到N2O，即可鑒定為目的菌。不能依據(jù)培養(yǎng)液中硝酸鹽的濃度變低來鑒定目的菌，原因是 其他微生物也能利用硝酸鹽進(jìn)行代謝，硝酸鹽濃度同樣會降低其他微生物也能利用硝酸鹽進(jìn)行代謝，硝酸鹽濃度同樣會降低。
（4）為保持純化后的微生物菌種的純凈，需要對菌種進(jìn)行保藏。臨時保藏的方法具有 保存時間短、容易被污染或產(chǎn)生變異保存時間短、容易被污染或產(chǎn)生變異等缺點(diǎn)，它比較適合那些使用頻率高的菌種的保藏。
（5）C/N（碳氮含量比）對反硝化效率有一定的影響?？蒲腥藛T測得不同C/N條件下目的菌對硝酸鹽的去除率，結(jié)果如圖2所示：
科研人員提出，在利用目的菌株處理工業(yè)污水時，需要適當(dāng)向污水中投放少量淀粉，據(jù)圖分析這樣做的主要目的是 適當(dāng)提高污水中的C/N，從而提高目的菌對污水中硝酸鹽的去除率適當(dāng)提高污水中的C/N，從而提高目的菌對污水中硝酸鹽的去除率。
NO
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3
【考點(diǎn)】微生物的選擇培養(yǎng)（稀釋涂布平板法）．
【答案】防止皿蓋上的水珠落入培養(yǎng)基，避免培養(yǎng)基中的水分過快的揮發(fā)；檢測培養(yǎng)基平板滅菌是否合格；涂布器；無氧、42℃；藍(lán)；其他微生物也能利用硝酸鹽進(jìn)行代謝，硝酸鹽濃度同樣會降低；保存時間短、容易被污染或產(chǎn)生變異；適當(dāng)提高污水中的C/N，從而提高目的菌對污水中硝酸鹽的去除率
【解答】
【點(diǎn)評】
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發(fā)布：2024/8/8 8:0:9組卷：4引用：2難度：0.5
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1．目前全球肆虐的病毒是一種以前尚未在人類中發(fā)現(xiàn)的新型冠狀病毒，命名為2019-nCoV（以下簡稱nCoV）。它具有已知RNA病毒中最大的基因組，單鏈RNA大小為3萬個堿基左右。結(jié)構(gòu)如圖。
疫苗預(yù)防
針對該病毒現(xiàn)在還沒有具有針對性的特效藥，因此各國都寄希望于研制出針對該病毒的疫苗。疫苗分為以下5種：滅活疫苗，減毒活疫苗，重組蛋白疫苗，核酸疫苗，重組病毒載體疫苗。
（1）重組蛋白疫苗：中科院微生物所動物試驗(yàn)階段
可以讓大腸桿菌表達(dá)出nCoV的S蛋白，打進(jìn)人體，讓免疫系統(tǒng)針對該蛋白產(chǎn)生抗體。該過程需要將S蛋白基因轉(zhuǎn)入大腸桿菌體內(nèi)，你認(rèn)為對該過程描述合理的是（多選）
A．用PCR可以短時間獲得大量的S蛋白基因，根據(jù)需要在基因兩端加上的限制性酶切位點(diǎn)可以不同
B．該過程的表達(dá)載體上要具有復(fù)制原點(diǎn)、起始密碼子、終止密碼子、抗生素抗性基因和S蛋白基因
C．通過Ca2+處理大腸桿菌以獲得感受態(tài)細(xì)胞，該狀態(tài)的細(xì)胞能夠提高表達(dá)載體整合到擬核上的效率
D．能夠利用大腸桿菌DNA擴(kuò)增出目的基因，說明成功導(dǎo)入了S蛋白基因，是否表達(dá)S蛋白還需要抗體檢測
（2）獲得的工程菌需要篩選才能投入疫苗的生產(chǎn)，下列于此過程有關(guān)表述正確的是（多選）
A．篩選和鑒定菌種要在培養(yǎng)基中加入瓊脂，大腸桿菌在伊紅美藍(lán)培養(yǎng)基上會出現(xiàn)黑色菌落
B．培養(yǎng)基配制過程要稱量、溶化、滅菌，倒平板之前調(diào)節(jié)pH值到適宜范圍以利于細(xì)菌繁殖
C．如果需要計(jì)數(shù)，則用稀釋涂布平板法涂布平板之后對菌落計(jì)數(shù)，顯微鏡直接觀察值可能偏小
D．將高產(chǎn)S蛋白的菌種保存起來可以用4℃臨時保藏和-20℃甘油管藏等方法，后者保存時間長
（3）工程菌操作整個過程需要嚴(yán)格的無菌操作，下列無菌操作方式合理的有（多選）
A．每次使用接種環(huán)前后都要進(jìn)行灼燒滅菌，但是灼燒之后要置于菌液冷卻才能使用
B．液體培養(yǎng)基用高壓蒸汽滅菌，加了瓊脂的固體培養(yǎng)基可以用干熱滅菌箱滅菌
C．操作者雙手應(yīng)該用酒精擦拭消毒，但是該過程不能完全殺死微生物的芽孢和孢子
D．倒平板凝固后要將培養(yǎng)皿倒置，目的是防止水分過快蒸發(fā)以及冷凝水回滴造成污染
（4）核酸疫苗：美國人體試驗(yàn)階段（未做動物試驗(yàn)）
將S蛋白對應(yīng)的mRNA用脂膜包裹打進(jìn)人體，讓它在細(xì)胞里表達(dá)病毒的S蛋白。以下對該方法的誤解是（多選）
A．核酸注入人體細(xì)胞只會造成體細(xì)胞的遺傳物質(zhì)發(fā)生變化，并不影響生殖細(xì)胞
B．該過程流程大大簡化，節(jié)省了重組蛋白疫苗的生產(chǎn)S蛋白的時間
C．mRNA如果成功進(jìn)入細(xì)胞，翻譯產(chǎn)生的S蛋白就可以在細(xì)胞內(nèi)對抗病毒
D．核酸外脂膜與細(xì)胞膜融合，幫助核酸進(jìn)入細(xì)胞指導(dǎo)S蛋白的翻譯
（5）重組病毒載體疫苗：軍事科學(xué)院臨床Ⅱ期階段（動物試驗(yàn)和臨床Ⅰ期完成）
是把nCoV的部分基因植入到不致病但侵染能力很強(qiáng)的腺病毒載體里，重組成新病毒。任何疫苗在大規(guī)模使用前，最好通過動物試驗(yàn)再進(jìn)行臨床試驗(yàn)。大規(guī)模試驗(yàn)用哺乳動物一般用小鼠，但是小鼠沒有人類ACE2蛋白，因此獲得大量人源ACE2轉(zhuǎn)基因小鼠成為動物疫苗試驗(yàn)的重要步驟。在此過程中下 列表述合理的是（多選）
A．鑒于人類基因組測序已經(jīng)完成，既可以從人類基因組文庫中獲取目的基因，又可以從cDNA文庫中獲取
B．鑒于小鼠也是真核生物，既可以將人類ACE2完整的基因?qū)胄∈篌w內(nèi)，又可以導(dǎo)入無內(nèi)含子的目 的基因
C．鑒于受體細(xì)胞是小鼠的受精卵細(xì)胞，重組DNA分子導(dǎo)入最好用顯微注射的方法，該方法不適合原核生物細(xì)胞
D．如果有轉(zhuǎn)人源ACE2基因小鼠若干，要在短時間獲得大量實(shí)驗(yàn)小鼠，可用核移植的方法克隆很多小鼠發(fā)布：2024/12/29 8:0:2組卷：14引用：1難度：0.6 -
2．某種物質(zhì)S（一種含有C、H、N的有機(jī)物）難以降解，會對環(huán)境造成污染，只有某些細(xì)菌能降解S。研究人員按照如圖所示流程從淤泥中分離得到能高效降解S的細(xì)菌菌株。實(shí)驗(yàn)過程中需要甲、乙兩種培養(yǎng)基，甲的組分為無機(jī)鹽、水和S，乙的組分為無機(jī)鹽、水、S和Y?；卮鹣铝袉栴}：
（1）乙培養(yǎng)基中的Y物質(zhì)是。甲、乙培養(yǎng)基均屬于培養(yǎng)基。
（2）實(shí)驗(yàn)中初步估測搖瓶M中細(xì)菌細(xì)胞數(shù)為2×107個/mL，若要在每個平板上涂布0.1mL稀釋后的菌液，且保證每個平板上長出的菌落數(shù)不超過200個，則至少應(yīng)將搖瓶M中的菌液稀釋倍。
（3）在步驟⑤的篩選過程中，發(fā)現(xiàn)當(dāng)培養(yǎng)基中的S超過某一濃度時，某菌株對S的降解量反而下降，其原因可能是（答出1點(diǎn)即可）。
（4）上述實(shí)驗(yàn)中，甲、乙兩種培養(yǎng)基所含有的組分雖然不同，但都能為細(xì)菌的生長提供4類營養(yǎng)物質(zhì)，即。發(fā)布：2024/12/27 8:0:2組卷：5引用：2難度：0.7 -
3．致病菌與抗生素。
結(jié)核病是由結(jié)核分枝桿菌引起的傳染病。 結(jié)核分枝桿菌的細(xì)胞壁厚脂質(zhì)含量高，能抵御不利自然環(huán)境，在干痰中可存活 6-8 個月，若黏附于塵埃上可保持傳染性 8-10 天。人體被感染后結(jié)核分枝桿菌可侵犯全身各組織器官，但以肺部感染最多。
（1）結(jié)核病的傳播途徑主要是。
A、空氣傳播 B、接觸傳播 C、媒介物傳播 D、病媒傳播
（2）根據(jù)病原菌在體內(nèi)的感染部位，推測結(jié)核分枝桿菌的代謝方式是。
A、異養(yǎng)厭氧型 B、自養(yǎng)厭氧型 C、自養(yǎng)好氧型 D、異養(yǎng)好氧型
為探究不同抗生素對結(jié)核分枝桿菌的抑菌效果，研究者從患者體內(nèi)提取的病原菌進(jìn)行分離培養(yǎng)。 培養(yǎng)結(jié)核分枝桿菌的培養(yǎng)基主要含有天門冬氨酸、甘油、雞蛋黃、KH2PO4、MgSO4等。
（3）此培養(yǎng)基成分中既能作為氮源同時提供生長因子的是。
將分離得到的結(jié)核分枝桿菌進(jìn)行增殖培養(yǎng)后，取細(xì)菌培養(yǎng)液 2 滴涂布于固體培養(yǎng)基上，然后將浸有相同濃度不同種類的抗生素圓紙片置于培養(yǎng)基表面，37℃培養(yǎng) 4 周，實(shí)驗(yàn)結(jié)果如圖1．其中圓紙片 A、B 分別浸過抗生素 A 和抗生素 B，圓紙片 C 浸過抗生素 A、B 的混合物。圖2是細(xì)菌結(jié)構(gòu)示意圖，圖中箭頭表示不同抗生素的作用位置。
（4）欲得到如圖1實(shí)驗(yàn)結(jié)果，接種過程用到的實(shí)驗(yàn)器材有（多選）。
（5）實(shí)驗(yàn)中圓紙片 D 用作實(shí)驗(yàn)對照，對圓紙片D的處理方法是。根據(jù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果，說明圓紙片周圍清晰區(qū)大小與抗生素抑菌效果的關(guān)系：，并從抗生素對細(xì)菌產(chǎn)生的作用解釋圓紙片C周圍清晰區(qū)大于圓紙片A和B的原因。發(fā)布：2024/12/22 8:0:1組卷：33引用：1難度：0.6
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