非洲豬瘟是由非洲豬瘟病毒（ASFV）感染家豬和野豬引起的一種高致病性傳染病?？蒲腥藛T在病毒ASFV的K基因（大小為790bp）中間插入熒光素酶基因（Gluc基因）和增強(qiáng)型綠色熒光蛋白基因（EGFP基因），從而構(gòu)建可以進(jìn)行快速觀察及定量檢測酶活性的重組病毒（ASFV-Gluc-EGFP）體系，如圖1所示?；卮鹣铝袉栴}：

（1）構(gòu)建重組病毒時(shí)用的HindⅢ和BamHⅠ都是

限制性核酸內(nèi)切（或限制）

限制性核酸內(nèi)切（或限制）

酶。
（2）為了初步鑒定重組病毒是否構(gòu)建成功，科研人員提取病毒DNA，選用引物組合

引物1和引物4

引物1和引物4

進(jìn)行PCR擴(kuò)增，擴(kuò)增結(jié)果有1、2兩種類型，如圖2所示。該實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明Gluc基因和EGFP基因

有

有

（填“有”或“沒有”）插入病毒ASFV的K基因。

（3）為了進(jìn)一步驗(yàn)證重組病毒是否成功表達(dá)，科研人員將豬肺泡巨噬細(xì)胞（PAMS）培養(yǎng)一段時(shí)間后，平均分成A、B兩組，其中A組接種病毒ASFV，B組接種

重組病毒

重組病毒

。支持“重組病毒成功表達(dá)”的實(shí)驗(yàn)結(jié)果為：

B組可觀察到綠色熒光，檢測到熒光素酶有活性；A組無熒光，熒光素酶無活性

B組可觀察到綠色熒光，檢測到熒光素酶有活性；A組無熒光，熒光素酶無活性

。
（4）同時(shí)，科研人員又分別測定了A、B兩組的病毒數(shù)量變化，發(fā)現(xiàn)兩者無顯著差異，該結(jié)果表明

Gluc基因和EGFP基因的插入不影響病毒的復(fù)制

Gluc基因和EGFP基因的插入不影響病毒的復(fù)制

。因此，該重組病毒體系的構(gòu)建可為后續(xù)研究ASFV的致病機(jī)制及藥物治療奠定基礎(chǔ)。