如圖1是獲取用于構(gòu)建基因表達(dá)載體的含人生長(zhǎng)激素基因的DNA片段（DNA復(fù)制子鏈延伸方向是5′→3′，轉(zhuǎn)錄方向?yàn)樽蟆遥┦疽鈭D，圖2是所用質(zhì)粒示意圖，其上的Amp^r表示青霉素抗性基因，Tet^t表示四環(huán)素抗性基因。有關(guān)限制酶的識(shí)別序列和酶切位點(diǎn)如表。請(qǐng)據(jù)圖回答：

限制酶識(shí)別序列和酶切位點(diǎn)表

限制酶	HindⅢ	BamHⅠ	PstⅠ	EcoRⅠ	SmaⅠ	BglⅡ
識(shí)別序列（5′→3′）	A↓AGCTT	G↓GATCC	C↓TGCAG	G↓AATTC	CCC↓GGG	A↓GATCT

（1）①過(guò)程催化形成磷酸二酯鍵的酶有

反轉(zhuǎn)錄酶和DNA聚合酶

反轉(zhuǎn)錄酶和DNA聚合酶

，合成的人生長(zhǎng)激素基因中

有

有

（選填“有”或“無(wú)”）與終止密碼子相應(yīng)的堿基序列。
（2）引物1由5′→3′的堿基序列為

AGATCTGCATCCTCCAGG

AGATCTGCATCCTCCAGG

，引物2應(yīng)含有限制酶

BamHⅠ

BamHⅠ

的識(shí)別序列；從圖1的過(guò)程②開始進(jìn)行PCR擴(kuò)增，第六次循環(huán)結(jié)束時(shí)，圖中用于構(gòu)建基因表達(dá)載體的DNA片段所占比例是

13

16

13

16

。
（3）在構(gòu)建表達(dá)載體的過(guò)程中對(duì)圖中質(zhì)粒、DNA片段進(jìn)行合適的完全酶切后，向兩者的混合物中加入DNA連接酶，若只考慮DNA切段兩兩連接，則混合物中將形成

6

6

種環(huán)狀DNA。
（4）2018年11月基因編輯嬰兒事件震驚了世界，輿論一片嘩然，某科研團(tuán)隊(duì)利用“CRISPR/Cas9”技術(shù)將受精卵中的艾滋病病毒受體基因CCR5進(jìn)行修改，擬培育出具有艾滋病免疫能力的基因編輯嬰兒。圖3為向?qū)NA引導(dǎo)Cas9蛋白切割CCR5基因（目標(biāo)DNA）示意圖。
①向?qū)NA的合成需要

RNA聚合

RNA聚合

酶。Cas9蛋白是一種

限制

限制

酶。
②“GRISPR/Cas9”技術(shù)，是利用

顯微注射

顯微注射

法將Cas9蛋白和特定的引導(dǎo)序列導(dǎo)入受精卵中發(fā)揮基因編輯作用。
③基因編輯嬰兒引起輿論的關(guān)注，很多科學(xué)家表示反對(duì)，請(qǐng)給出合理的理由

細(xì)胞內(nèi)DNA上可能不止一個(gè)Cas9酶識(shí)別和切割位點(diǎn)，可能導(dǎo)致脫靶

細(xì)胞內(nèi)DNA上可能不止一個(gè)Cas9酶識(shí)別和切割位點(diǎn)，可能導(dǎo)致脫靶

。