木質(zhì)纖維素是地球上最為豐富的可再生資源，中國(guó)科學(xué)家利用基因工程的方法構(gòu)建了一株嗜熱厭氧桿菌H，以花生殼，玉米芯等為原料發(fā)酵生產(chǎn)生物燃料乙醇，以期提高農(nóng)業(yè)廢棄物的整體利用價(jià)值。請(qǐng)回答下列問(wèn)題：
（1）研究者將取樣器放入溫泉底部取樣，將樣本加入到含有

無(wú)菌水（蒸餾水）

無(wú)菌水（蒸餾水）

的錐形瓶中稀釋，利用厭氧技術(shù)將稀釋液接種到以纖維素為

唯一碳源

唯一碳源

的培養(yǎng)基中初步獲得能降解纖維素的嗜熱厭氧桿菌。培養(yǎng)過(guò)程所用的玻璃器皿需用

干熱滅菌（濕熱滅菌、高壓蒸汽滅菌）

干熱滅菌（濕熱滅菌、高壓蒸汽滅菌）

（填方法）滅菌。
（2）基于嗜熱厭氧桿菌的特殊代謝能力（圖a），研究人員構(gòu)建了雙功能醇醛脫氫酶基因（Adh）的過(guò)量表達(dá)載體，圖b為構(gòu)建表達(dá)載體時(shí)所需的關(guān)鍵條件。

①為保證雙功能醇醛脫氫酶基因（Adh）能通過(guò)雙酶切以正確方向插入質(zhì)粒，不能使用的限制酶為

EcoRⅠ

EcoRⅠ

。
②目的基因的獲取方法有很多種，通常使用PCR技術(shù)擴(kuò)增，該技術(shù)所需的基本條件有模板、原料、

耐高溫的DNA聚合酶（TaqDNA聚合酶）

耐高溫的DNA聚合酶（TaqDNA聚合酶）

（酶）和引物，引物是指

一小段能與DNA母鏈的一段堿基序列互補(bǔ)配對(duì)的短單鏈核酸

一小段能與DNA母鏈的一段堿基序列互補(bǔ)配對(duì)的短單鏈核酸

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③將重組表達(dá)載體導(dǎo)入嗜熱厭氧桿菌，然后置于含有

紅霉素

紅霉素

的選擇培養(yǎng)基中進(jìn)行篩選，經(jīng)鑒定及擴(kuò)大培養(yǎng)得到工程菌。
（3）將構(gòu)建的工程菌進(jìn)行搖瓶發(fā)酵，結(jié)果發(fā)現(xiàn)乙醇產(chǎn)量提高，副產(chǎn)物乙酸產(chǎn)量下降。結(jié)合其代謝途徑，分析出現(xiàn)這種結(jié)果的原因

Adh基因過(guò)量表達(dá)的Adh酶增多，與P酶競(jìng)爭(zhēng)結(jié)合乙酰輔酶A

Adh基因過(guò)量表達(dá)的Adh酶增多，與P酶競(jìng)爭(zhēng)結(jié)合乙酰輔酶A

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