組織型纖溶酶原激活劑(tPA)是體內(nèi)纖溶系統(tǒng)的生理性激動劑,也是一種新型的血栓溶解劑。生長激素(GH)可促進動物細胞增殖和乳腺生長發(fā)育及維持泌乳,在動物遺傳育種領(lǐng)域具有重要的功能。研究人員將GH基因?qū)朕D(zhuǎn)tPA基因小鼠體內(nèi),獲得雙轉(zhuǎn)基因小鼠,以期提高小鼠乳汁中的tPA表達量?;卮鹣铝袉栴}:
(1)首先構(gòu)建GH基因的表達載體,如圖所示:
GH基因上游的CMV能被 RNA聚合酶RNA聚合酶識別并結(jié)合,從而開啟轉(zhuǎn)錄過程;若GH基因無內(nèi)含子,則它是通過 逆(反)轉(zhuǎn)錄逆(反)轉(zhuǎn)錄(過程)得到的。
(2)對卵細胞供體和受體小鼠進行 同期發(fā)情同期發(fā)情處理,之后還要給供體小鼠注射促性腺激素,以促進其超數(shù)排卵,然后與轉(zhuǎn)tPA基因公鼠交配。供體小鼠受精后,獲取受精卵,將GH基因表達載體用 顯微注射顯微注射法導入受精卵中。將轉(zhuǎn)基因受精卵轉(zhuǎn)移至受體小鼠體內(nèi),待仔鼠出生。有時為了獲取大量小鼠胚胎細胞用于藥物篩選,可用 胰蛋白胰蛋白酶分散小鼠囊胚的內(nèi)細胞團,取分散細胞作為初始材料進行培養(yǎng)。培養(yǎng)瓶中添加抑制因子或者在 飼養(yǎng)層飼養(yǎng)層細胞上培養(yǎng),維持不分化的狀態(tài),以提高小鼠胚胎細胞克隆的成功率。
(3)PCR是一項在生物體外復制特定DNA片段的核酸合成技術(shù),它又稱為 多聚酶鏈式多聚酶鏈式反應。要對GH基因和tPA基因進行PCR擴增,則需提取細胞基因組DNA,并設(shè)計 44種引物。
【考點】基因工程的操作過程綜合.
【答案】RNA聚合酶;逆(反)轉(zhuǎn)錄;同期發(fā)情;顯微注射;胰蛋白;飼養(yǎng)層;多聚酶鏈式;4
【解答】
【點評】
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