高等植物中的乙烯生物合成受到發(fā)育階段和環(huán)境的共同調節(jié)，其中乙烯合成酶在這一過程中起到至關重要的作用。擬南芥乙烯合成酶相關基因主要有兩種：AtACS4和AtACS5。為研究以上基因表達水平與發(fā)育階段的關系，科學家將AtACS4和AtACS5的啟動子分別和GUS報告基因融合，并轉入擬南芥。圖1為使用的載體圖譜，kanr為卡那霉素抗性基因，Ampr為氨芐青霉素抗性基因?；卮鹣铝袉栴}：
（1）構建重組DNA分子：取足量的擬南芥葉片并提取 DNADNA，通過 PCR擴增PCR擴增得到兩種啟動子片段的拷貝，為使啟動子正確插入載體，在獲得的啟動子兩端分別引入 PvuⅡPvuⅡ和 HindⅢHindⅢ兩種不同限制酶的識別序列，再用 限制性內切核酸酶、DNA連接限制性內切核酸酶、DNA連接酶處理啟動子與表達載體獲得重組DNA分子。
（2）農桿菌轉化擬南芥：將兩種重組DNA分子分別導入農桿菌，后將轉化的農桿菌分別置于添加了 卡那霉素卡那霉素的LB液體培養(yǎng)基中進行培養(yǎng)。為確定培養(yǎng)所得農桿菌確實轉入了重組DNA分子，可以通過 PCRPCR進行檢測。后將轉基因農桿菌與消毒后的擬南芥葉片共同培養(yǎng)，將共同培養(yǎng)后的煙草葉片轉入含有營養(yǎng)物以及 氨芐青霉素、植物激素氨芐青霉素、植物激素的 MSMS培養(yǎng)基（填寫培養(yǎng)基名稱）中脫菌、誘導培養(yǎng)和篩選。經過發(fā)芽和生根培養(yǎng)后的組培苗需進行煉苗，煉苗的作用是 提高試管苗對外部環(huán)境的適應能力提高試管苗對外部環(huán)境的適應能力。
（3）擬南芥乙烯合成酶的表達特點：使用GUS染液染色后，具GUS基因表達產物的部位會現(xiàn)藍色，用肉眼或在顯微鏡下可看到，且在一定程度下根據(jù)染色深淺可反映出GUS基因的表達水平。使用GUS染液對不同發(fā)育階段的兩種轉基因擬南芥進行染色。AtACS4和AtACS5的啟動子和GUS報告基因融合后進行轉化獲得的轉基因擬南芥經過GUS染色后的實驗結果依次為圖2的A、B。可以推測AtACS4和AtACS5的表達特點為 AtACS4在成熟植株的葉片中表達量較高/AtACS5在幼嫩植株的葉片中表達量較高/AtACS4在幼嫩植株根中不表達，在成熟植株根中表達/兩種基因在擬南芥的任何生長時期都有表達AtACS4在成熟植株的葉片中表達量較高/AtACS5在幼嫩植株的葉片中表達量較高/AtACS4在幼嫩植株根中不表達，在成熟植株根中表達/兩種基因在擬南芥的任何生長時期都有表達。
【考點】基因工程的操作過程綜合．
【答案】DNA；PCR擴增；PvuⅡ；HindⅢ；限制性內切核酸酶、DNA連接；卡那霉素；PCR；氨芐青霉素、植物激素；MS；提高試管苗對外部環(huán)境的適應能力；AtACS4在成熟植株的葉片中表達量較高/AtACS5在幼嫩植株的葉片中表達量較高/AtACS4在幼嫩植株根中不表達，在成熟植株根中表達/兩種基因在擬南芥的任何生長時期都有表達
【解答】
【點評】
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發(fā)布：2024/8/6 8:0:9組卷：6引用：2難度：0.5
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1．下列有關基因工程技術和蛋白質工程技術敘述正確的是（ ?。?/h2>
發(fā)布：2025/1/5 8:0:1組卷：6引用：1難度：0.7 -
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3．幾丁質是許多真菌細胞壁的重要成分，幾丁質酶可催化幾丁質水解。通過基因工程將幾丁質酶基因轉入植物體內，可增強其抗真菌病的能力。回答下列問題：
（1）基因工程中所用的目的基因可以人工合成，也可以從基因文庫中獲得?；蛭膸彀?和。
（2）生物體細胞內的DNA復制開始時，解開DNA雙鏈的酶是。在體外利用PCR技術擴增目的基因時，使反應體系中的模板DNA解鏈為單鏈的條件是。上述兩個解鏈過程的共同點是破壞了DNA雙鏈分子中的。
（3）DNA連接酶是將兩個DNA片段連接起來的酶，常見的有和，其中既能連接黏性末端又能連接平末端的是。當幾丁質酶基因和質粒載體連接時，DNA連接酶催化形成的化學鍵是。
（4）提取RNA時，提取液中需添加RNA酶抑制劑，其目的是。
（5）若獲得的轉基因植株（幾丁質酶基因已經整合到植物的基因組中）抗真菌病的能力沒有提高，根據(jù)中心法則分析，其可能的原因是。發(fā)布：2025/1/5 8:0:1組卷：2引用：2難度：0.6