四尾柵藻生長周期短、適應(yīng)性強(qiáng)，是一種高潛力生物柴油新型原料，但油脂產(chǎn)量低。研究人員從含油量高的紫蘇中提取DGAT1（催化油脂合成的關(guān)鍵酶）基因，并成功導(dǎo)入到四尾柵藻細(xì)胞內(nèi)，獲得轉(zhuǎn)基因的產(chǎn)油四尾柵藻。其制備流程如圖所示，圖中Ampr表示氨芐青霉素抗性基因，LacZ基因可使細(xì)菌利用培養(yǎng)基中的物質(zhì)X-gal進(jìn)而使菌落呈現(xiàn)藍(lán)色，無該基因或該基因被破壞，菌落呈白色。請分析回答下列問題：
（1）從高表達(dá)的紫蘇組織細(xì)胞中提取總的RNA，在 逆轉(zhuǎn)錄逆轉(zhuǎn)錄酶作用下獲得cDNA，用于PCR擴(kuò)增。該過程獲得cDNA的原理是 以mRNA為模板按照堿基互補(bǔ)配對原則合成cDNA以mRNA為模板按照堿基互補(bǔ)配對原則合成cDNA。
（2）PCR擴(kuò)增DGATI基因時(shí)，使反應(yīng)體系中的模板cDNA解旋為單鏈的條件是 加熱至90～95℃加熱至90～95℃。在DNA延伸的過程中，使用Taq酶而不使用大腸桿菌DNA聚合酶的主要原因是 Taq酶熱穩(wěn)定性高而大腸桿菌DNA聚合酶在高溫下失活Taq酶熱穩(wěn)定性高而大腸桿菌DNA聚合酶在高溫下失活。
（3）構(gòu)建的pMD19-DGAT1導(dǎo)入到經(jīng) CaCl2CaCl2溶液處理的感受態(tài)大腸桿菌細(xì)胞中，并接種到含 X-gal和氨芐青霉素X-gal和氨芐青霉素的培養(yǎng)基中培養(yǎng)。一段時(shí)間后，挑選 白白色的菌落以提取質(zhì)粒pMD19-DGAT1。
（4）用限制酶BamHⅠ和XbaⅠ切割pMD19-DGAT1和pBI121，將其連接成重組表達(dá)載體pBI121-DGAT1，并將其導(dǎo)入四尾柵藻細(xì)胞中。與單酶切相比，雙酶切的優(yōu)點(diǎn)是 使DGAT1基因能定向插入表達(dá)載體，減少自身環(huán)化使DGAT1基因能定向插入表達(dá)載體，減少自身環(huán)化。
【考點(diǎn)】基因工程的操作過程綜合；DNA片段的擴(kuò)增與電泳鑒定．
【答案】逆轉(zhuǎn)錄；以mRNA為模板按照堿基互補(bǔ)配對原則合成cDNA；加熱至90～95℃；Taq酶熱穩(wěn)定性高而大腸桿菌DNA聚合酶在高溫下失活；CaCl2；X-gal和氨芐青霉素；白；使DGAT1基因能定向插入表達(dá)載體，減少自身環(huán)化
【解答】
【點(diǎn)評】
聲明：本試題解析著作權(quán)屬菁優(yōu)網(wǎng)所有，未經(jīng)書面同意，不得復(fù)制發(fā)布。
發(fā)布：2024/6/27 10:35:59組卷：1引用：2難度：0.7
相似題
-
1．下列有關(guān)基因工程技術(shù)和蛋白質(zhì)工程技術(shù)敘述正確的是（ ?。?/h2>
發(fā)布：2025/1/5 8:0:1組卷：6引用：1難度：0.7 -
2．下列有關(guān)基因工程的敘述，正確的是（ ?。?/h2>
發(fā)布：2024/12/31 5:0:5組卷：3引用：2難度：0.7 -
3．幾丁質(zhì)是許多真菌細(xì)胞壁的重要成分，幾丁質(zhì)酶可催化幾丁質(zhì)水解。通過基因工程將幾丁質(zhì)酶基因轉(zhuǎn)入植物體內(nèi)，可增強(qiáng)其抗真菌病的能力?；卮鹣铝袉栴}：
（1）基因工程中所用的目的基因可以人工合成，也可以從基因文庫中獲得?；蛭膸彀?和。
（2）生物體細(xì)胞內(nèi)的DNA復(fù)制開始時(shí)，解開DNA雙鏈的酶是。在體外利用PCR技術(shù)擴(kuò)增目的基因時(shí)，使反應(yīng)體系中的模板DNA解鏈為單鏈的條件是。上述兩個(gè)解鏈過程的共同點(diǎn)是破壞了DNA雙鏈分子中的。
（3）DNA連接酶是將兩個(gè)DNA片段連接起來的酶，常見的有和，其中既能連接黏性末端又能連接平末端的是。當(dāng)幾丁質(zhì)酶基因和質(zhì)粒載體連接時(shí)，DNA連接酶催化形成的化學(xué)鍵是。
（4）提取RNA時(shí)，提取液中需添加RNA酶抑制劑，其目的是。
（5）若獲得的轉(zhuǎn)基因植株（幾丁質(zhì)酶基因已經(jīng)整合到植物的基因組中）抗真菌病的能力沒有提高，根據(jù)中心法則分析，其可能的原因是。發(fā)布：2025/1/5 8:0:1組卷：2引用：2難度：0.6
把好題分享給你的好友吧~~