基因敲除又稱基因打靶，該技術通過外源DNA與染色體DNA之間的同源重組，進行精確的定點修飾和基因改造，具有專一性強、染色體DNA可與目的片段共同穩(wěn)定遺傳等特點?？捎糜诨蚬δ艿难芯亢蛦位蜻z傳病的治療。為研究小鼠細胞中基因X的功能，科學家通過同源重組法將小鼠胚胎干細胞中的基因X的活性消除并獲得嵌合體小鼠。在制備置換載體時，將neor基因（抗新霉素基因）作為置換基因X的插入突變，同時在neor基因外側添加HSV-tk基因，該基因的表達產物能將DHPG轉化為有毒物質而使細胞死亡，如圖甲所示。置換載體導入ES細胞后，可發(fā)生同源重組和非同源重組，如圖乙所示。
（1）根據(jù)圖甲可知，在構建基因X的置換載體時，需用相同的限制酶限制酶酶切割基因X和neor基因neor基因，該酶的切割位點應位于基因X的內部和neor基因的兩端基因X的內部和neor基因的兩端，用相同酶切的目的是產生相同的黏性末端，便于被DNA連接酶連接產生相同的黏性末端，便于被DNA連接酶連接。
（2）ES細胞在功能上具有的特征是發(fā)育的全能性發(fā)育的全能性，常用顯微注射顯微注射技術將置換載體導入ES細胞，將置換載體導入ES細胞后，如何將發(fā)生同源重組的ES細胞篩選出來？并簡述理由。方法：在培養(yǎng)基中加入新霉素和DHPG，培養(yǎng)導入置換載體的細胞在培養(yǎng)基中加入新霉素和DHPG，培養(yǎng)導入置換載體的細胞；理由：未成功導入的ES細胞中不含neor基因，不抗新霉素，所以在培養(yǎng)基中無法存活。成功導入，但發(fā)生非同源重組的ES細胞中，HSK-tk基因可以表達，其產物會將培養(yǎng)基中的DHPG轉化為有毒物質從而殺死ES細胞。只有發(fā)生同源重組的細胞，含有neor基因，同時無HSV-tk基因，可以在培養(yǎng)基中存活未成功導入的ES細胞中不含neor基因，不抗新霉素，所以在培養(yǎng)基中無法存活。成功導入，但發(fā)生非同源重組的ES細胞中，HSK-tk基因可以表達，其產物會將培養(yǎng)基中的DHPG轉化為有毒物質從而殺死ES細胞。只有發(fā)生同源重組的細胞，含有neor基因，同時無HSV-tk基因，可以在培養(yǎng)基中存活。
（3）將嵌合體胚胎移植到受體小鼠并能在受體小鼠內存活的原因是：受體對外來胚胎基本上不發(fā)生免疫排斥反應受體對外來胚胎基本上不發(fā)生免疫排斥反應。
【考點】基因工程的操作過程綜合．
【答案】限制酶；neor基因；基因X的內部和neor基因的兩端；產生相同的黏性末端，便于被DNA連接酶連接；發(fā)育的全能性；顯微注射；在培養(yǎng)基中加入新霉素和DHPG，培養(yǎng)導入置換載體的細胞；未成功導入的ES細胞中不含neor基因，不抗新霉素，所以在培養(yǎng)基中無法存活。成功導入，但發(fā)生非同源重組的ES細胞中，HSK-tk基因可以表達，其產物會將培養(yǎng)基中的DHPG轉化為有毒物質從而殺死ES細胞。只有發(fā)生同源重組的細胞，含有neor基因，同時無HSV-tk基因，可以在培養(yǎng)基中存活；受體對外來胚胎基本上不發(fā)生免疫排斥反應
【解答】
【點評】
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發(fā)布：2024/6/27 10:35:59組卷：28引用：1難度：0.6
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1．下列有關基因工程技術和蛋白質工程技術敘述正確的是（ ）
發(fā)布：2025/1/5 8:0:1組卷：6引用：1難度：0.7 -
2．下列有關基因工程的敘述，正確的是（ ?。?/h2>
發(fā)布：2024/12/31 5:0:5組卷：3引用：2難度：0.7 -
3．幾丁質是許多真菌細胞壁的重要成分，幾丁質酶可催化幾丁質水解。通過基因工程將幾丁質酶基因轉入植物體內，可增強其抗真菌病的能力?；卮鹣铝袉栴}：
（1）基因工程中所用的目的基因可以人工合成，也可以從基因文庫中獲得?；蛭膸彀?和。
（2）生物體細胞內的DNA復制開始時，解開DNA雙鏈的酶是。在體外利用PCR技術擴增目的基因時，使反應體系中的模板DNA解鏈為單鏈的條件是。上述兩個解鏈過程的共同點是破壞了DNA雙鏈分子中的。
（3）DNA連接酶是將兩個DNA片段連接起來的酶，常見的有和，其中既能連接黏性末端又能連接平末端的是。當幾丁質酶基因和質粒載體連接時，DNA連接酶催化形成的化學鍵是。
（4）提取RNA時，提取液中需添加RNA酶抑制劑，其目的是。
（5）若獲得的轉基因植株（幾丁質酶基因已經整合到植物的基因組中）抗真菌病的能力沒有提高，根據(jù)中心法則分析，其可能的原因是。發(fā)布：2025/1/5 8:0:1組卷：2引用：2難度：0.6