亮氨酸脫氫酶是一類(lèi)氧化還原酶，在臨床生化診斷上有重要作用。有研究表明，在亮氨酸脫氫酶基因原有啟動(dòng)子（P_HpaII）之后加上信號(hào)肽（引導(dǎo)新合成的蛋白質(zhì)向分泌通路轉(zhuǎn)移的一段肽鏈）序列，可提高亮氨酸脫氫酶產(chǎn)量?？蒲腥藛T進(jìn)一步研究雙啟動(dòng)子（P_HpaII、P_amyQ）及雙啟動(dòng)子后再分別添加3種信號(hào)肽序列對(duì)亮氨酸脫氫酶產(chǎn)量的影響，主要實(shí)驗(yàn)流程如圖。請(qǐng)回答下列問(wèn)題。

（1）啟動(dòng)子的功能是

RNA聚合酶識(shí)別和結(jié)合的位點(diǎn)，驅(qū)動(dòng)轉(zhuǎn)錄

RNA聚合酶識(shí)別和結(jié)合的位點(diǎn)，驅(qū)動(dòng)轉(zhuǎn)錄

。組成信號(hào)肽的基本單位是

氨基酸

氨基酸

。
（2）過(guò)程①中，PCR反應(yīng)體系中添加的dNTP的功能有

作為原料、提供能量

作為原料、提供能量

，添加的一對(duì)引物是

P1和P3

P1和P3

。
P1：5′-GGGAATCATATGGGCGGCGTTCTGTTTCTG-3′
P2：5′-CCGATTAAGCTTGGCGGCGTTCTGCATCTG-3′
P3：5′-CGCGGATCCATAAGGCAGTAAAGAGGCTTTTG-3′
P4：5′-GCCGGATCCACAAGGCAGTATTTACTGCCTT-3′
（3）過(guò)程②中，啟動(dòng)子P_amyQ能與質(zhì)粒1連接的分子基礎(chǔ)是

都是由脫氧核苷酸構(gòu)成的雙鏈結(jié)構(gòu)

都是由脫氧核苷酸構(gòu)成的雙鏈結(jié)構(gòu)

。將重組質(zhì)粒1導(dǎo)入枯草桿菌前先用Ca²⁺處理枯草桿菌，其主要目的是

使枯草桿菌處于感受態(tài)

使枯草桿菌處于感受態(tài)

。轉(zhuǎn)化后的枯草桿菌一般要用稀釋涂布平板法接種到添加

卡那霉素

卡那霉素

的培養(yǎng)基上進(jìn)行篩選。
（4）科研人員將質(zhì)粒1、重組質(zhì)粒1和3種重組質(zhì)粒2分別導(dǎo)入枯草桿菌得到甲～戊5種重組枯草桿菌，進(jìn)行發(fā)酵后提取上清液中的亮氨酸脫氫酶，酶活力測(cè)定結(jié)果如表。

重組菌	甲	乙	丙	丁	戊
酶活力/U?mL-1	10.11	31.24	0.44	6.49	21.76

①結(jié)果表明，

添加雙啟動(dòng)子

添加雙啟動(dòng)子

最有利于提高亮氨酸脫氫酶產(chǎn)量。
②雙啟動(dòng)子后添加信號(hào)肽序列影響酶的表達(dá)或分泌量的原因可能有

ac

ac

。
a.信號(hào)肽序列影響了亮氨酸脫氫酶基因的表達(dá)
b.信號(hào)肽序列影響了啟動(dòng)子轉(zhuǎn)錄成相應(yīng)的mRNA序列
c.信號(hào)肽序列表達(dá)產(chǎn)物使亮氨酸脫氫酶分泌路徑發(fā)生改變