凝乳酶是奶制品加工中經(jīng)常用到的一種酶,其傳統(tǒng)制備方法的產(chǎn)量遠遠不能滿足生產(chǎn)需要??茖W家研究利用基因工程技術生產(chǎn)凝乳酶,其部分環(huán)節(jié)如圖所示。請據(jù)圖回答問題:
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(1)從剛出生5天的小牛皺胃組織中提取總RNA,經(jīng) 逆轉錄逆轉錄過程獲得總cDNA。通過PCR技術可在總cDNA中專一性擴增出凝乳酶基因,原因是 引物是根據(jù)凝乳酶基因的一段已知序列設計合成的(或引物能與凝乳酶基因的cDNA 特異性結合)引物是根據(jù)凝乳酶基因的一段已知序列設計合成的(或引物能與凝乳酶基因的cDNA 特異性結合)。
(2)過程①所使用的工具酶有 限制酶和DNA連接酶限制酶和DNA連接酶。凝乳酶基因和質粒上均有NdeⅠ和XhoⅠ兩種酶的識別序列,分別是-C↓ATATG-,-C↓TCGAG-。用以上兩種酶分別切割目的基因和質粒,得到的黏性末端分別為 -TATA和-AGCT--TATA和-AGCT-。
(3)大腸桿菌作為凝乳酶基因受體細胞的主要優(yōu)點有 繁殖快、易培養(yǎng)、產(chǎn)量高,且遺傳物質相對較少繁殖快、易培養(yǎng)、產(chǎn)量高,且遺傳物質相對較少(至少答出兩點)。用重組質粒轉化大腸桿菌,一般情況下,不能直接用未處理的大腸桿菌作為受體細胞,原因是 未處理的大腸桿菌吸收質粒(外源DNA)的能力極弱未處理的大腸桿菌吸收質粒(外源DNA)的能力極弱。
(4)篩選出成功導入重組質粒的大腸桿菌,經(jīng)多代培養(yǎng)后,仍能從大腸桿菌中提取出凝乳酶基因。據(jù)此判斷,你認為凝乳酶基因是否已在大腸桿菌中成功轉化?請說明你的觀點及理由:不能。理由是大腸桿菌中檢測到凝乳酶基因,說明目的基因已經(jīng)成功導入大腸桿菌中,但不能說明凝乳酶基因已經(jīng)成功轉化不能。理由是大腸桿菌中檢測到凝乳酶基因,說明目的基因已經(jīng)成功導入大腸桿菌中,但不能說明凝乳酶基因已經(jīng)成功轉化。
【考點】基因工程的操作過程綜合.
【答案】逆轉錄;引物是根據(jù)凝乳酶基因的一段已知序列設計合成的(或引物能與凝乳酶基因的cDNA 特異性結合);限制酶和DNA連接酶;-TATA和-AGCT-;繁殖快、易培養(yǎng)、產(chǎn)量高,且遺傳物質相對較少;未處理的大腸桿菌吸收質粒(外源DNA)的能力極弱;不能。理由是大腸桿菌中檢測到凝乳酶基因,說明目的基因已經(jīng)成功導入大腸桿菌中,但不能說明凝乳酶基因已經(jīng)成功轉化
【解答】
【點評】
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