家畜胚胎的性別鑒定技術對畜牧業(yè)的發(fā)展具有重要意義。巢式PCR擴增反應在兩次PCR反應中使用兩組不同引物，先使用外引物對目標區(qū)域DNA片段進行第一次PCR擴增，產(chǎn)生中間產(chǎn)物，然后使用內(nèi)引物對中間產(chǎn)物進行第二次PCR擴增，產(chǎn)生目標產(chǎn)物。如圖1是式PCR工作原理示意圖，請回答：
（1）巢式PCR反應體系中需要加入模板、DNA聚合酶DNA聚合酶、dNTP（原料）dNTP（原料）、引物、Mg2+、緩沖液等。
（2）相比于常規(guī)PCR獲得的產(chǎn)物而言，巢式PCR獲得的產(chǎn)物特異性 更強更強，原因是如果利用外引物擴增產(chǎn)生了錯誤片段，再利用內(nèi)引物擴增在錯誤片段上進行引物配對并擴增的概率 升高升高。
（3）巢式PCR通常在一個試管中進行第一階段反應，然后將中間產(chǎn)物等轉移到第二試管中進行第二階段反應，不在同一試管完成的主要原因是 防止引物配對特異性不強造成的非特異性擴增的污染防止引物配對特異性不強造成的非特異性擴增的污染。
（4）科研人員利用多重巢式PCR技術同時擴增Y染色體上雄性決定基因（SRY）和常染色體上的酪蛋白基因（CSN1S1），進行早期胚胎的性別鑒定，并將鑒定后的胚胎進行移植。表是主要實驗步驟，請完成表：
| 實驗目的 | 方法步驟要點 |
| 胚胎樣品DNA提取 | 選取囊胚的① 滋養(yǎng)層 滋養(yǎng)層 細胞提取DNA |
| PCR引物的設計和合成 | 根據(jù)牛的SRY和CSN1S1基因序列設計合成② 2 2 對引物 |
| PCR過程 | 預變性→③ 變性 變性 →退火→延伸 |
| 觀察擴增結果 | 電泳分析 |
| 受體牛④ 同期發(fā)情 同期發(fā)情 處理 |
對受體牛注射前列腺素 |
| 胚胎移植 | 將篩選出的胚胎移植到受體牛的子宮內(nèi) |
A
A
。可以確定1～5號中 1，2，4
1，2，4
號胚胎為雌性。（6）牛胚胎性別的鑒定除了可以利用PCR外，下列方法也可行的有
②③④
②③④
。①差速離心法
②核酸探針雜交法
③染色體核型分析法
④H-Y抗血清免疫學法（H-Y抗原編碼基因位于Y染色體上）
【考點】DNA片段的擴增與電泳鑒定．
【答案】DNA聚合酶；dNTP（原料）；更強；升高；防止引物配對特異性不強造成的非特異性擴增的污染；滋養(yǎng)層；2；變性；同期發(fā)情；A；1，2，4；②③④
【解答】
【點評】
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發(fā)布：2024/6/27 10:35:59組卷：33引用：2難度：0.6
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1．數(shù)字PCR技術是一種核酸分子絕對定量技術，其原理如圖所示。下列有關敘述正確的是（ ?。?img alt="菁優(yōu)網(wǎng)" src="http://img.jyeoo.net/quiz/images/202204/49/6d911ea3.png" style="vertical-align:middle" />
發(fā)布：2024/12/30 23:30:2組卷：6引用：2難度：0.6 -
2．PCR技術不僅可以擴增目的基因，還可用于定點誘變目的基因等。大引物PCR就是一種定點突變技術。大引物PCR需要用到引物進行兩次PCR，其操作步驟為：
①根據(jù)目的基因序列設計引物，得到兩個常規(guī)引物，分別為常規(guī)上游引物和常規(guī)下游引物；
②根據(jù)突變堿基所處序列位置設計突變上游引物，突變位點位于突變引物序列的中間位置
③由突變上游引物與常規(guī)下游引物進行第一次PCR反應得到下游大引物；
④用得到的下游大引物中和另一個常規(guī)上游引物進行第二次PCR擴增，得到突變目的基因序列?；卮鹣铝袉栴}：
（1）PCR擴增的第一步是使雙鏈模板DNA變性。DNA中G+C的含量與變性要求的溫度有關，DNA中G+C的含量越多，要求的變性溫度越高。其原因是。該PCR擴增技術所需的基本條件是種引物、原料、模板、。
（2）在第一次PCR反應中，形成圖示雙鏈DNA至少要經(jīng)過次復制。第一次PCR的產(chǎn)物DNA的條鏈作為第二次PCR所用的引物。與X射線誘變相比，該突變技術的優(yōu)點是。
（3）如果要利用微生物進一步克隆PCR定點誘變產(chǎn)物，其步驟包括：、、微生物的篩選和培養(yǎng)、從菌群中獲取更多目的基因。將獲取目的基因和質粒進行連接后，需先用處理農(nóng)桿菌以便將基因表達載體導入馬鈴薯細胞，將馬鈴薯細胞培養(yǎng)成幼苗時經(jīng)過的兩個過程是。檢測目的基因是否在馬鈴薯細胞中轉錄出了mRNA，所采用的方法是。發(fā)布：2024/12/30 23:0:2組卷：32引用：3難度：0.6 -
3．下列關于DNA片段擴增及其鑒定的說法錯誤的是（ ）
發(fā)布：2024/12/30 23:30:2組卷：3引用：3難度：0.7
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