真菌AFPs基因表達(dá)的蛋白質(zhì)能提高細(xì)胞的抗凍能力，將AFPs基因?qū)敕阎信嘤箖龇哑贩N，能延長(zhǎng)番茄果實(shí)的儲(chǔ)存期?？蒲腥藛T通過(guò)轉(zhuǎn)基因技術(shù)培育出超量表達(dá)AFPs基因的轉(zhuǎn)基因番茄。在超量表達(dá)AFPs基因載體的構(gòu)建中，含AFPs基因的DNA片段以及基因表達(dá)載體的元件組成情況如圖所示，其中強(qiáng)啟動(dòng)子能驅(qū)動(dòng)基因的持續(xù)轉(zhuǎn)錄，M基因會(huì)影響AFPs基因的表達(dá)效果。
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（1）利用PCR技術(shù)進(jìn)行擴(kuò)增可得到大量的AFPs基因，PCR擴(kuò)增目的基因時(shí)，設(shè)計(jì)的引物只能與模板鏈在3'端配對(duì)，其原因是 DNA聚合酶只能從引物的3'端開始連接脫氧核苷酸DNA聚合酶只能從引物的3'端開始連接脫氧核苷酸。
（2）為獲得能正確表達(dá)的重組質(zhì)粒，應(yīng)分別使用哪些限制酶對(duì)質(zhì)粒、含強(qiáng)啟動(dòng)子和AFPs基因的DNA片段進(jìn)行切割：BamHⅠ、XhoⅠBamHⅠ、XhoⅠ、BamHⅠ、SalⅠBamHⅠ、SalⅠ。
（3）已知基因表達(dá)載體乙的長(zhǎng)度為6.7Kb,M基因片段長(zhǎng)度為0.6kb,強(qiáng)啟動(dòng)子+AFPs基因片段的長(zhǎng)度為2.8kb,推測(cè)表達(dá)載體甲的長(zhǎng)度約為 4.54.5kb。
（4）抗凍相關(guān)基因超量表達(dá)依賴于適宜的啟動(dòng)子。啟動(dòng)子可分為組成型啟動(dòng)子（每種組織器官中均發(fā)揮作用）、組織特異型啟動(dòng)子（特定組織器官中才能發(fā)揮作用）和誘導(dǎo)型啟動(dòng)子（特定條件刺激下才能發(fā)揮作用），構(gòu)建基因表達(dá)載體時(shí)可單獨(dú)使用某一類型的啟動(dòng)子，也可組合使用多種類型的啟動(dòng)子。從減少物質(zhì)和能量消耗的角度出發(fā)，最好選擇 誘導(dǎo)型啟動(dòng)子誘導(dǎo)型啟動(dòng)子，使番茄果實(shí)在寒冷刺激下才啟動(dòng)抗寒基因的表達(dá)。
（5）對(duì)轉(zhuǎn)基因番茄植株進(jìn)行鑒定時(shí)發(fā)現(xiàn)，有些植株雖有AFPs基因，但幾乎沒(méi)有AFPs蛋白，造成該現(xiàn)象的原因可能有 基因轉(zhuǎn)化過(guò)程中強(qiáng)啟動(dòng)子可能丟失或斷裂，未能真正轉(zhuǎn)化成功；雖然轉(zhuǎn)化成功，但是AFPs基因保持沉默，不能有效表達(dá)基因轉(zhuǎn)化過(guò)程中強(qiáng)啟動(dòng)子可能丟失或斷裂，未能真正轉(zhuǎn)化成功；雖然轉(zhuǎn)化成功，但是AFPs基因保持沉默，不能有效表達(dá)。（答出2項(xiàng)即可）
【考點(diǎn)】基因工程的操作過(guò)程綜合．
【答案】DNA聚合酶只能從引物的3'端開始連接脫氧核苷酸；BamHⅠ、XhoⅠ；BamHⅠ、SalⅠ；4.5；誘導(dǎo)型啟動(dòng)子；基因轉(zhuǎn)化過(guò)程中強(qiáng)啟動(dòng)子可能丟失或斷裂，未能真正轉(zhuǎn)化成功；雖然轉(zhuǎn)化成功，但是AFPs基因保持沉默，不能有效表達(dá)
【解答】
【點(diǎn)評(píng)】
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發(fā)布：2024/8/8 8:0:9組卷：16引用：1難度：0.5
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1．下列有關(guān)基因工程技術(shù)和蛋白質(zhì)工程技術(shù)敘述正確的是（ ?。?/h2>
發(fā)布：2025/1/5 8:0:1組卷：6引用：1難度：0.7 -
2．下列有關(guān)基因工程的敘述，正確的是（ ?。?/h2>
發(fā)布：2024/12/31 5:0:5組卷：3引用：2難度：0.7 -
3．幾丁質(zhì)是許多真菌細(xì)胞壁的重要成分，幾丁質(zhì)酶可催化幾丁質(zhì)水解。通過(guò)基因工程將幾丁質(zhì)酶基因轉(zhuǎn)入植物體內(nèi)，可增強(qiáng)其抗真菌病的能力?；卮鹣铝袉?wèn)題：
（1）基因工程中所用的目的基因可以人工合成，也可以從基因文庫(kù)中獲得?；蛭膸?kù)包括和。
（2）生物體細(xì)胞內(nèi)的DNA復(fù)制開始時(shí)，解開DNA雙鏈的酶是。在體外利用PCR技術(shù)擴(kuò)增目的基因時(shí)，使反應(yīng)體系中的模板DNA解鏈為單鏈的條件是。上述兩個(gè)解鏈過(guò)程的共同點(diǎn)是破壞了DNA雙鏈分子中的。
（3）DNA連接酶是將兩個(gè)DNA片段連接起來(lái)的酶，常見(jiàn)的有和，其中既能連接黏性末端又能連接平末端的是。當(dāng)幾丁質(zhì)酶基因和質(zhì)粒載體連接時(shí)，DNA連接酶催化形成的化學(xué)鍵是。
（4）提取RNA時(shí)，提取液中需添加RNA酶抑制劑，其目的是。
（5）若獲得的轉(zhuǎn)基因植株（幾丁質(zhì)酶基因已經(jīng)整合到植物的基因組中）抗真菌病的能力沒(méi)有提高，根據(jù)中心法則分析，其可能的原因是。發(fā)布：2025/1/5 8:0:1組卷：2引用：2難度：0.6
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