原生質(zhì)體制備需要在較高滲透壓的甘露醇溶液中進(jìn)行。為了探究原生質(zhì)體制備中甘露醇的適宜濃度，某實(shí)驗(yàn)小組設(shè)計(jì)了以下實(shí)驗(yàn)。請(qǐng)以原生質(zhì)體數(shù)目和體積變化為檢測(cè)指標(biāo)，根據(jù)提供的實(shí)驗(yàn)材料完善實(shí)驗(yàn)思路，預(yù)測(cè)實(shí)驗(yàn)結(jié)果并分析。
材料與用具：某植物單細(xì)胞懸液，2mol/L的甘露醇溶液，細(xì)胞壁水解酶，蒸餾水，培養(yǎng)瓶，血細(xì)胞計(jì)數(shù)板，顯微鏡（具有測(cè)距功能）等。
（要求與說明：原生質(zhì)體計(jì)數(shù)和原生質(zhì)體體積測(cè)量的具體操作過程不作要求，不考慮加入單細(xì)胞懸液對(duì)甘露醇溶液濃度的影響）
（1）實(shí)驗(yàn)思路：
①將2mol/L的甘露醇溶液按濃度梯度稀釋后分為若干組，調(diào)節(jié)溶液

pH

pH

后加入各組培養(yǎng)瓶，再加入細(xì)胞壁水解酶。
②向各組培養(yǎng)瓶中加入適量的單細(xì)胞懸液。
③一段時(shí)間后，

用血細(xì)胞計(jì)數(shù)板和顯微鏡進(jìn)行原生質(zhì)體數(shù)目和體積測(cè)定

用血細(xì)胞計(jì)數(shù)板和顯微鏡進(jìn)行原生質(zhì)體數(shù)目和體積測(cè)定

。
④對(duì)實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。
（2）預(yù)測(cè)實(shí)驗(yàn)結(jié)果（設(shè)計(jì)一個(gè)坐標(biāo)系，用曲線表示預(yù)測(cè)的實(shí)驗(yàn)結(jié)果）：

。
（3）分析與討論
①除了酶解法以外，還可以將愈傷組織通過

液體懸浮培養(yǎng)

液體懸浮培養(yǎng)

法制備成單細(xì)胞懸液。
②可用血細(xì)胞計(jì)數(shù)板對(duì)原生質(zhì)體進(jìn)行計(jì)數(shù)，一般計(jì)數(shù)總數(shù)不少于300個(gè)細(xì)胞。現(xiàn)有一計(jì)數(shù)板，計(jì)數(shù)區(qū)共25個(gè)中格，每個(gè)中格有16個(gè)小格，采用五點(diǎn)采樣法，計(jì)數(shù)的每個(gè)小格中應(yīng)平均不少于

4

4

個(gè)原生質(zhì)體（四舍五入取整數(shù)）。
③當(dāng)甘露醇溶液濃度低于一定值時(shí)，原生質(zhì)體的數(shù)目開始減少，原因是

甘露醇溶液濃度小于部分原生質(zhì)體內(nèi)部濃度，部分原生質(zhì)體吸水漲破

甘露醇溶液濃度小于部分原生質(zhì)體內(nèi)部濃度，部分原生質(zhì)體吸水漲破

，所以要使用較高濃度的甘露醇溶液；但是甘露醇溶液濃度也不能太高，因?yàn)闈舛冗^高的甘露醇溶液會(huì)讓原生質(zhì)體

過度失水

過度失水

，從而降低原生質(zhì)體活性。檢測(cè)原生質(zhì)體活性時(shí)可用細(xì)胞的

呼吸速率

呼吸速率

為指標(biāo)。