四尾柵藻生長周期短、適應性強，是一種高潛力生物柴油新型原料，但油脂產量低。研究人員從含油量高的紫蘇中提取DGAT1（催化油脂合成的關鍵酶）基因，并成功導入到四尾柵藻細胞內，獲得轉基因的產油四尾柵藻。其制備流程如圖所示，圖中Amp^r表示氨芐青霉素抗性基因，LacZ基因可使細菌利用培養(yǎng)基中的物質X-gal進而使菌落呈現(xiàn)藍色，無該基因或該基因被破壞，菌落呈白色。請分析回答下列問題。

（1）從含油量高的紫蘇組織細胞中提取總的RNA，在
逆轉錄
逆轉錄
酶作用下獲得cDNA，用于PCR擴增，該過程的原理是按
堿基互補配對
堿基互補配對
原則合成cDNA。
（2）PCR擴增DGATI基因時，使反應體系中的模板cDNA解旋為單鏈的條件是
加熱至90-95℃（94℃）
加熱至90-95℃（94℃）
。在DNA延伸的過程中，使用Taq酶而不使用大腸桿菌DNA聚合酶的主要原因是
Taq酶熱穩(wěn)定性高而大腸桿菌DNA聚合酶在高溫下失活
Taq酶熱穩(wěn)定性高而大腸桿菌DNA聚合酶在高溫下失活
。
（3）圖中大腸桿菌是pMD19-DGAT1的理想的受體細胞，主要原因是
繁殖快（或可以短時間產生大量質粒）
繁殖快（或可以短時間產生大量質粒）
。構建的pMD19-DGAT1導入到經
CaCl₂
CaCl₂
溶液處理的感受態(tài)大腸桿菌細胞中，并接種到含
X-gal和氨芐青霉素
X-gal和氨芐青霉素
的培養(yǎng)基中培養(yǎng)。一段時間后，挑選
白
白
色的菌落以提取質粒pMD19-DGAT1。
（4）用限制酶
BamHⅠ和XbaⅠ
BamHⅠ和XbaⅠ
切割pMD19-DGAT1和pBI121，將其連接成重組表達載體pBI121-DGAT1，并將其導入四尾柵藻細胞中。與單酶切相比，雙酶切的優(yōu)點有
使DGAT1基因能定向插入表達載體
使DGAT1基因能定向插入表達載體
、
防止自身環(huán)化
防止自身環(huán)化
。

【答案】逆轉錄；堿基互補配對；加熱至90-95℃（94℃）；Taq酶熱穩(wěn)定性高而大腸桿菌DNA聚合酶在高溫下失活；繁殖快（或可以短時間產生大量質粒）；CaCl₂；X-gal和氨芐青霉素；白；BamHⅠ和XbaⅠ；使DGAT1基因能定向插入表達載體；防止自身環(huán)化

【解答】

【點評】

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發(fā)布：2024/5/8 8:0:8組卷：11引用：3難度：0.4

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發(fā)布：2024/10/31 13:0:2組卷：46引用：2難度：0.7

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