pBR322質(zhì)粒是基因工程中較常用的運(yùn)載體。如圖所示為pBR322質(zhì)粒，其中amp^r（氨芐青霉素抗性基因）和tet^r（四環(huán)素抗性基因）為標(biāo)記基因，ori為復(fù)制原點(diǎn)，其他均為限制酶及其識別位點(diǎn)，并且每種限制酶的識別位點(diǎn)都只有一個(gè)。回答下列問題：
（1）制備重組質(zhì)粒，需要

限制

限制

酶和

DNA連接

DNA連接

酶。若制備重組質(zhì)粒時(shí)，使用PvuⅠ切割該質(zhì)粒，則檢測目的基因是否導(dǎo)入受體細(xì)胞，需要在培養(yǎng)基中添加

四環(huán)素

四環(huán)素

。
（2）該質(zhì)粒中的BamHⅠ識別的核苷酸序列及切割位點(diǎn)為-G↓GATCC-，而Sau3AⅠ識別的核苷酸序列只有4個(gè)堿基。若BamHⅠ和Sau3AⅠ分別切割DNA所形成的DNA片段能拼接成一條DNA鏈，則Sau3AⅠ識別的核苷酸序列及切割位點(diǎn)為

—↓GATC—

—↓GATC—

。該拼接在一起的DNA片段，

不一定能

不一定能

（填“能”“不能”或“不一定能”）被BamHⅠ識別。
（3）與圖示質(zhì)粒相比，完整的重組質(zhì)粒中還應(yīng)有

啟動子、終止子和目的基因

啟動子、終止子和目的基因

三種特殊的DNA片段。若受體細(xì)胞為大腸桿菌，則該菌經(jīng)鈣離子處理后，將具備的

容易吸收外界DNA

容易吸收外界DNA

特性。
（4）若要通過基因工程獲得轉(zhuǎn)基因萵苣，首先將構(gòu)建好的目的基因表達(dá)載體導(dǎo)入土壤農(nóng)桿菌，目的是利用農(nóng)桿菌的

轉(zhuǎn)化作用

轉(zhuǎn)化作用

，使目的基因進(jìn)入萵苣細(xì)胞，并將其插入到萵苣細(xì)胞中的

染色體DNA

染色體DNA

上，使目的基因的遺傳特性得以穩(wěn)定維持和表達(dá)，形成轉(zhuǎn)基因萵苣。要想檢測獲得的轉(zhuǎn)基因萵苣中目的基因是否表達(dá)，在分子水平上可用

抗原-抗體雜交

抗原-抗體雜交

法進(jìn)行檢測，如果出現(xiàn)雜交帶，說明目的基因已經(jīng)表達(dá)蛋白質(zhì)產(chǎn)品，轉(zhuǎn)基因萵苣培育成功。