Ⅰ.ALDH2是人體酒精代謝的關(guān)鍵酶，當(dāng)前人們對有效解酒保肝藥物的需求日益迫切，高效表達出ALDH2具有非常重要的意義。某研究小組將人源ALDH2基因進行優(yōu)化后，與TPIp一同整合到酵母菌中表達，以得到合適的工程菌，以下是該工作的部分過程。
（1）構(gòu)建重組質(zhì)粒
如圖1所示，人源ALDH2基因來自質(zhì)粒pUC57，需要和ALDH2基因一同整合的TPIp在質(zhì)粒M中，TPIp能讓ALDH2高效表達，由此推測TPIp是

C

C

。
A.起始密碼子
B.終止密碼子
C.強啟動子
D.強終止子
分別用合適的限制酶酶切兩種質(zhì)粒后，電泳并回收目的基因和線性化載體，然后用DNA連接酶處理，接著將連接好的質(zhì)粒轉(zhuǎn)化導(dǎo)入大腸桿菌，用涂布有青霉素（抗原核生物生長的抗生素，對真菌無影響；圖1質(zhì)粒上的Amp表示能抗青霉素的基因）的培養(yǎng)基平板篩選出單菌落，最后提取其中的質(zhì)粒，并用圖1中的限制酶進行雙酶切后再進行測序驗證。為了達到上述實驗的目的，圖1右邊的4種質(zhì)粒（M-I～M-4）中，可以用的質(zhì)粒是

M-1

M-1

。

（2）基因組件TRPIL-URA3-TPIp-ALDH2-TPI-TRPIR的構(gòu)建上一步構(gòu)建的重組質(zhì)粒并不能直接轉(zhuǎn)化入酵母細胞中，因為其中的標(biāo)記基因不合適，不合適的原因是

青霉素只能抑制原核細胞生長，酵母菌是真菌，不能被抑制，重組質(zhì)粒是否轉(zhuǎn)化入酵母菌，酵母菌都能生長，達不到篩選目的

青霉素只能抑制原核細胞生長，酵母菌是真菌，不能被抑制，重組質(zhì)粒是否轉(zhuǎn)化入酵母菌，酵母菌都能生長，達不到篩選目的

。
URA3是尿嘧啶合成酶基因，所以研究小組將該基因作為標(biāo)記基因，由于未找到合適的限制酶酶切，小組用融合PCR的方法構(gòu)建URA3-TPIp-ALDH2-TPIt基因組件。融合PCR的過程如圖2，若要達到融合基因構(gòu)建的目的，此過程的關(guān)鍵是引物P2和P3

末端有互補序列

末端有互補序列

。用同樣的辦法，將酵母菌的TRPI基因的部分片段融入，構(gòu)建基因組件TRPIL-URA3-TPIp-ALDH2-TPIt-TRPIR。融合酵母菌的TRPI基因的部分片段是為下一步同源重組做準(zhǔn)備。

（3）基因工程菌的構(gòu)建
通過同源重組的方法將上述構(gòu)建的基因組件整合到酵母菌中，在

缺乏尿嘧啶的固體

缺乏尿嘧啶的固體

培養(yǎng)基上挑出單菌落，初步表示獲得整合成功的酵母菌。同源重組的過程大致如圖3所示。

Ⅱ.某校生物興趣小組研讀教材，了解到孟德爾研究了豌豆莖的高度、子葉顏色等7對相對性狀的遺傳情況。一部分小組成員查閱資料發(fā)現(xiàn)豌豆體細胞中正好含有7對同源染色體。于是有的小組成員根據(jù)這些信息，初步認為豌豆控制這7對相對性狀的基因分別位于7對同源染色體上。
（1）小組一部分成員再現(xiàn)了孟德爾豌豆高矮莖相對性狀的雜交實驗。他們選取豌豆的高莖植株與矮莖植株雜交，F(xiàn)₁全為高莖，F(xiàn)₂分離比不是約3：1，而是約35：1。同學(xué)們對此作出的分析是：F₁（Dd）在發(fā)育過程中受環(huán)境因素影響，導(dǎo)致染色體數(shù)目加倍形成四倍體（DDdd），四倍體DDdd產(chǎn)生的配子種類及比例是

DD：Dd：dd=1：4：1

DD：Dd：dd=1：4：1

。受精時，雌雄配子隨機結(jié)合，F(xiàn)₂出現(xiàn)了

5

5

種基因型，從而使F₂表現(xiàn)型的比值為高莖：矮莖=35：1。為證明以上分析是否正確，可以通過測交實驗來測定F₁的基因型，測交的實驗結(jié)果是

高莖：矮莖≈5：1

高莖：矮莖≈5：1

，才可驗證上述分析結(jié)論。
（2）小組另一部分成員隨機選擇豌豆子葉顏色和種皮顏色這兩種性狀進行兩對相對性狀的雜交實驗：P→F₁→F₂。實驗結(jié)果發(fā)現(xiàn)F₂中黃子葉灰種皮：黃子葉白種皮：綠子葉灰種皮：綠子葉白種皮約為9：3：3：1，但還是有點偏差。對于偏差，同學(xué)們的一種解釋是統(tǒng)計的數(shù)據(jù)存在誤差，但這兩對相對性狀仍遵循自由組合定律。另一些成員查閱資料，發(fā)現(xiàn)孟德爾研究的7對相對性狀的遺傳因子并不是分別位于7對同源染色體上，而是分布在4對同源染色體上。
根據(jù)這些信息，關(guān)于F₁比值偏離9：3：3：1的另一種解釋是：控制子葉顏色和種皮顏色的基因位于同一對同源染色體上，因這兩對基因相距

較遠

較遠

（填“較近”或“較遠”），F(xiàn)₁在形成配子時，

它們之間發(fā)生交換的概率就越大，產(chǎn)生的四種配子的比例也越接近1：1：1：1

它們之間發(fā)生交換的概率就越大，產(chǎn)生的四種配子的比例也越接近1：1：1：1

。雌雄配子結(jié)合后，導(dǎo)致F₂出現(xiàn)四種表現(xiàn)型，且它們之間的比例大體上接近9：3：3：1。