重癥聯(lián)合免疫缺陷（簡稱SCID）的發(fā)病率估計為1/100000，主要表現(xiàn)為體液免疫和細胞免疫缺陷，屬于聯(lián)合免疫缺陷病中最嚴重的類型，絕大部分兒童表現(xiàn)為淋巴細胞減少癥，未經(jīng)治療，重癥聯(lián)合免疫缺陷絕大部分具有致死性，患兒經(jīng)常于1歲內(nèi)死亡。研究發(fā)現(xiàn)，IKK激酶參與動物體內(nèi)免疫細胞的分化。臨床上發(fā)現(xiàn)某SCID患兒IKK基因編碼區(qū)第1183位堿基T突變?yōu)镃，導(dǎo)致IKK上第395位酪氨酸被組氨酸代替。為研究該患兒發(fā)病機制，研究人員利用純合野生鼠為材料應(yīng)用PCR定點誘變技術(shù)獲得突變基因并培育出SCID模型小鼠（純合）?；卮鹣铝袉栴}：
（1）在使用PCR定點誘變技術(shù)獲得突變基因的過程中，需要

耐高溫的DNA聚合

耐高溫的DNA聚合

酶的催化。還需要加入引物（一小段能與DNA母鏈的一段堿基序列互補配對的短單鏈核酸），引物的作用是

使DNA聚合酶能夠從引物的3端開始連接脫氧核苷酸

使DNA聚合酶能夠從引物的3端開始連接脫氧核苷酸

。
（2）如圖為雜合轉(zhuǎn)基因鼠F₀的培育過程，突變基因不能直接導(dǎo)入小鼠的受精卵，需要先構(gòu)建

基因表達載體

基因表達載體

，具體操作流程是

用同種限制酶或能產(chǎn)生相同黏性末端的限制酶分別切割含突變基因的DNA片段和載體，然后利用DNA連接酶將突變基因片段拼接到載體的切口處

用同種限制酶或能產(chǎn)生相同黏性末端的限制酶分別切割含突變基因的DNA片段和載體，然后利用DNA連接酶將突變基因片段拼接到載體的切口處

。培育雜合轉(zhuǎn)基因鼠F₀的過程中，將桑葚胚移植到代孕母鼠中能存活并發(fā)育，原理是

代孕母鼠對移入子宮的胚胎基本不發(fā)生免疫反應(yīng)

代孕母鼠對移入子宮的胚胎基本不發(fā)生免疫反應(yīng)

。

（3）研究人員經(jīng)鑒定、篩選獲得一只轉(zhuǎn)基因雜合鼠F₀，并確認突變基因已經(jīng)穩(wěn)定同源替代IKK基因。怎樣利用轉(zhuǎn)基因雜合鼠F₀獲得純合SCID模型鼠？請補充完整。
①實驗思路：

F₀與野生鼠雜交獲得F₁，F(xiàn)₁雌雄鼠隨機交配得F₂

F₀與野生鼠雜交獲得F₁，F(xiàn)₁雌雄鼠隨機交配得F₂

②提取F₂每只小鼠的基因組DNA，采用分子生物學(xué)方法，利用IKK基因探針和突變基因探針進行篩選。如何區(qū)分純合SCID模型鼠和雜合鼠，篩選方法是

若IKK基因探針檢測未出現(xiàn)雜交帶，突變基因探針檢測出現(xiàn)雜交帶，則為純合SCID模型鼠；若IKK基因探針檢測和突變基因探針都出現(xiàn)雜交帶，則為雜合鼠

若IKK基因探針檢測未出現(xiàn)雜交帶，突變基因探針檢測出現(xiàn)雜交帶，則為純合SCID模型鼠；若IKK基因探針檢測和突變基因探針都出現(xiàn)雜交帶，則為雜合鼠

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