真核基因的轉(zhuǎn)錄激活因子是兩種相對(duì)獨(dú)立的蛋白質(zhì)BD和AD組成的復(fù)合物，BD負(fù)責(zé)識(shí)別基因上游特定的DNA序列并與之結(jié)合（不同基因的BD不同），AD負(fù)責(zé)活化轉(zhuǎn)錄過程，兩者單獨(dú)作用時(shí)都不能啟動(dòng)轉(zhuǎn)錄。在科學(xué)研究中，往往利用該原理判斷兩種蛋白質(zhì)能否相互作用。具體過程為：讓BD基因與誘餌蛋白基因融合，讓AD基因與待測(cè)蛋白基因融合，并讓它們?cè)诮湍妇斜磉_(dá)出相應(yīng)的融合蛋白，若誘餌蛋白與待測(cè)蛋白可以相互作用，則AD和BD就能充分接近形成復(fù)合物，并啟動(dòng)標(biāo)記基因的表達(dá)。具體過程如圖1：
（1）構(gòu)建重組質(zhì)粒甲時(shí)使用雙酶切可以有效防止目的基因與質(zhì)粒

自身環(huán)化、反向連接

自身環(huán)化、反向連接

；用EcoRⅠ和SalⅠ雙酶切后，檢測(cè)樣品1、2中是否含有重組質(zhì)粒乙，電泳結(jié)果為圖2，其中

1

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號(hào)樣品為成功插入AD—待測(cè)蛋白基因的重組質(zhì)粒。
（2）質(zhì)粒導(dǎo)入前，Y2H酵母菌母液需用無菌的Ca²⁺處理，推測(cè)其目的是

使Y2H酵母菌細(xì)胞處于一種能吸收周圍環(huán)境中DNA的生理狀態(tài)

使Y2H酵母菌細(xì)胞處于一種能吸收周圍環(huán)境中DNA的生理狀態(tài)

。與原核細(xì)胞相比，由于酵母菌

有內(nèi)質(zhì)網(wǎng)和高爾基體對(duì)蛋白質(zhì)進(jìn)行加工

有內(nèi)質(zhì)網(wǎng)和高爾基體對(duì)蛋白質(zhì)進(jìn)行加工

，故蛋白質(zhì)的空間構(gòu)象不受影響，這也是選擇其作為受體細(xì)胞的原因之一。
（3）野生型Y2H酵母菌缺乏His3（組氨酸合成基因）和Mell（半乳糖苷酶合成基因），故可將這兩種基因作為標(biāo)記基因?qū)隮2H酵母菌將其制備成受體菌，來判斷誘餌蛋白與待測(cè)蛋白能否相互作用。（已知在培養(yǎng)基中含有X—gal的情況下，半乳糖苷酶的分泌可使酵母菌落呈藍(lán)色）
①將重組質(zhì)粒甲和乙導(dǎo)入受體菌后，若受體菌菌落在不含組氨酸的平板上能存活且在含有X—gal的平板上呈現(xiàn)藍(lán)色，則說明誘餌蛋白和待測(cè)蛋白能相互作用，理由是

誘餌蛋白與待測(cè)蛋白可以相互作用，則AD和BD就能充分接近形成復(fù)合物，并啟動(dòng)兩種標(biāo)記基因表達(dá)

誘餌蛋白與待測(cè)蛋白可以相互作用，則AD和BD就能充分接近形成復(fù)合物，并啟動(dòng)兩種標(biāo)記基因表達(dá)

。
②請(qǐng)?jiān)O(shè)計(jì)實(shí)驗(yàn)排除BD—誘餌融合蛋白單獨(dú)激活兩種標(biāo)記基因的可能。（寫出實(shí)驗(yàn)思路和結(jié)果）