學(xué)習(xí)以下材料，回答（1）～（5）題。
                                                 CRISPR/Cas基因編輯技術(shù)的脫靶檢測
1987年，科學(xué)家發(fā)現(xiàn)大腸桿菌基因組DNA中有一些重復(fù)結(jié)構(gòu)：一段29個堿基的序列反復(fù)出現(xiàn)了多次，兩兩之間都被32個堿基形成的看似無規(guī)律的間隔序列隔開，這種重復(fù)結(jié)構(gòu)被命名為CRISPR（圖1）。進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn)，多種細(xì)菌均有CRISPR結(jié)構(gòu)，且很多間隔序列與侵染細(xì)菌的一些噬菌體基因組序列一致。CRISPR的間隔序列轉(zhuǎn)錄形成的RNA（sgRNA）在細(xì)胞內(nèi)與Cas9酶結(jié)合成復(fù)合體，一旦在細(xì)胞中發(fā)現(xiàn)能與sgRNA配對的DNA分子，Cas9酶就會對該DNA分子進(jìn)行切割，破壞其功能（圖2）。

科學(xué)家基于此，構(gòu)建了對DNA序列進(jìn)行定點切割的CRISPR/Cas9基因編輯技術(shù)。將編碼Cas9酶和sgRNA的基因作為目的基因，構(gòu)建基因表達(dá)載體后導(dǎo)入受體細(xì)胞，可對細(xì)胞內(nèi)某個基因定點切割，引發(fā)被切割部位的隨機突變?？蒲腥藛T在CRISPR/Cas9編輯系統(tǒng)基礎(chǔ)上開發(fā)了CBE單堿基編輯系統(tǒng)，將Cas9酶替換成CBE融合蛋白，能將靶位點的胞嘧啶C脫氨基成尿嘧啶U，進(jìn)而通過DNA復(fù)制實現(xiàn)堿基對替換。
基因編輯可能造成非目標(biāo)序列的堿基改變，稱為脫靶。我國科研工作者建立了一種脫靶檢測技術(shù)，在小鼠受精卵分裂到2細(xì)胞時期，編輯其中1個，胚胎繼續(xù)發(fā)育到14.5天時，利用細(xì)胞分選技術(shù)選出被編輯過和未被編輯過的細(xì)胞，再進(jìn)行DNA提取和全基因組測序，比較兩組差異（圖3）。脫靶檢測發(fā)現(xiàn)CRISPR/Cas9編輯系統(tǒng)脫靶率較低，而CBE系統(tǒng)脫靶率較高，必須加以改進(jìn)才能應(yīng)用于遺傳病的臨床治療。

（1）列表比較限制性內(nèi)切核酸酶和CRISPR/Cas9復(fù)合體作用的異同點

	限制酶	CRISPR/Cas9
不同點	識別、切割DNA的特定核苷酸序列	根據(jù)sgRNA識別與之配對的DNA分子后進(jìn)行切割，且能引發(fā)突變
相同點	均能切割DNA

	限制酶	CRISPR/Cas9
不同點	識別、切割DNA的特定核苷酸序列	根據(jù)sgRNA識別與之配對的DNA分子后進(jìn)行切割，且能引發(fā)突變
相同點	均能切割DNA

。
（2）大腸桿菌不同菌株CRISPR區(qū)域中的間隔序列是不同的，導(dǎo)致這種差異最可能的原因是

不同菌株的祖先種感染的噬菌體有差異

不同菌株的祖先種感染的噬菌體有差異

。
（3）CBE編輯系統(tǒng)將靶位點胞嘧啶脫氨基后，細(xì)胞復(fù)制

2

2

次后，子代DNA中靶位點堿基對由C-G徹底替換成

T-A

T-A

，實現(xiàn)單堿基編輯。
（4）小鼠受精卵可以從雌鼠輸卵管中采集或通過

體外受精

體外受精

技術(shù)獲得。向2細(xì)胞期胚胎中的1個細(xì)胞進(jìn)行顯微注射時，因不需長期在受體細(xì)胞中穩(wěn)定存在和表達(dá)，可以以RNA形式注入的有

①②③

①②③

（填序號）。
①Cas9 mRNA
②CBE mRNA
③sgRNA
④標(biāo)記基因RNA
（5）脫靶檢測過程中標(biāo)記基因的作用是

分選被編輯細(xì)胞與未編輯細(xì)胞的后代

分選被編輯細(xì)胞與未編輯細(xì)胞的后代

。與用同一品系小鼠不同受精卵進(jìn)行脫靶檢測相比，上述脫靶檢測技術(shù)更加精準(zhǔn)，原因是

來自同一受精卵的基因相同，實驗組和對照組結(jié)果差異是基因編輯工具不同造成的

來自同一受精卵的基因相同，實驗組和對照組結(jié)果差異是基因編輯工具不同造成的

。