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研究表明，Lm-PB2蛋白在細(xì)胞核內(nèi)起調(diào)節(jié)細(xì)胞周期的作用。為研究Lm一PHB2蛋白的生物學(xué)活性，研究人員進(jìn)行了以下實(shí)驗(yàn).RT-PCR是將RNA的反轉(zhuǎn)錄（逆轉(zhuǎn)錄，RT）和cDNA的聚合酶鏈擴(kuò)增（PCR）相結(jié)合的技術(shù)，LacZ基因的編碼產(chǎn)物在X-gal和IPTG存在下，可使大腸桿菌菌落呈現(xiàn)藍(lán)色，否則菌落呈現(xiàn)白色?；卮鹣铝袉栴}：
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（1）過程①需要的酶有
逆轉(zhuǎn)錄酶和Taq酶
逆轉(zhuǎn)錄酶和Taq酶
，該過程需要在目的基因上添加適宜的酶切位點(diǎn)，擴(kuò)增時，引物和酶切位點(diǎn)的設(shè)計(jì)依據(jù)分別是
Lm-PHB2基因兩側(cè)的脫氧核苷酸序列
Lm-PHB2基因兩側(cè)的脫氧核苷酸序列
和
HindⅢ和EcoRI識別的脫氧核苷酸序列
HindⅢ和EcoRI識別的脫氧核苷酸序列
。
（2）過程③中篩選和培養(yǎng)大腸桿菌的培養(yǎng)基中需要加入
X-gal、IPTG、卡那霉素
X-gal、IPTG、卡那霉素
和碳源、氮源、水和無機(jī)鹽等物質(zhì)，挑取
白
白
色菌落中的微生物培養(yǎng)并提取質(zhì)粒，用限制酶進(jìn)行酶切，再對產(chǎn)物進(jìn)行檢測
（3）為檢測過程⑤得到的大腸桿菌是否表達(dá)Lm-PHB2基因，研究人員以注射了
Lm-PHB2蛋白
Lm-PHB2蛋白
后獲得的小鼠B淋巴細(xì)胞和骨髓瘤細(xì)胞制備單克隆抗體，之后再用制備的單克隆抗體與大腸桿菌中蛋白質(zhì)進(jìn)行
抗原一抗體雜交
抗原一抗體雜交
實(shí)驗(yàn)。

【考點(diǎn)】基因工程的操作過程綜合．
【答案】逆轉(zhuǎn)錄酶和Taq酶；Lm-PHB2基因兩側(cè)的脫氧核苷酸序列；HindⅢ和EcoRI識別的脫氧核苷酸序列；X-gal、IPTG、卡那霉素；白；Lm-PHB2蛋白；抗原一抗體雜交
【解答】
【點(diǎn)評】
聲明：本試題解析著作權(quán)屬菁優(yōu)網(wǎng)所有，未經(jīng)書面同意，不得復(fù)制發(fā)布。
發(fā)布：2024/8/21 9:0:4組卷：6引用：3難度：0.5
相似題

  • 1．胰蛋白酶抑制劑（TI）可抑制昆蟲蛋白酶活性，阻礙昆蟲消化蛋白質(zhì)。鹽藻是一種無細(xì)胞壁的單細(xì)胞真核綠藻，是能在高鹽條件下生長的新型生物反應(yīng)器。研究人員利用基因工程技術(shù)構(gòu)建TI基因的表達(dá)載體，并將其導(dǎo)入鹽藻細(xì)胞中，進(jìn)行了一系列實(shí)驗(yàn)?；卮鹣铝袉栴}：
    （1）研究人員利用PCR技術(shù)特異性地?cái)U(kuò)增目的基因的前提是需要
     
    ，以便合成引物。PCR過程中溫度的控制至關(guān)重要，將處理溫度控制在90～95℃，是為了
     
    。
    （2）獲取目的基因后，為了構(gòu)建基因表達(dá)載體，還需要使用的酶是
     
    （答出2種）。構(gòu)建成功的基因表達(dá)載體應(yīng)含有的結(jié)構(gòu)有目的基因、啟動子、
     
    （答出3種）等結(jié)構(gòu)。
    （3）研究人員將TI基因?qū)胧荏w細(xì)胞后進(jìn)行了檢測，相關(guān)步驟和實(shí)驗(yàn)結(jié)果如表所示。該檢測方法依據(jù)的原理是
     
    。據(jù)表分析，該實(shí)驗(yàn)結(jié)果說明
     
    。
    組別 實(shí)驗(yàn)步驟 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
    ① ② ③
    轉(zhuǎn)基因鹽藻（A組） 離心收集三組細(xì)
    胞制備可溶性蛋
    白質(zhì)樣品    		 將TI注射到大白
    兔體內(nèi)，獲取TI
    抗體    		 讓TI抗體和樣品
    進(jìn)行混合檢測    		 有雜交帶
    非轉(zhuǎn)基因鹽藻（B組） 無雜交帶
    陽性對照組（C組） 有雜交帶

    發(fā)布：2024/11/3 15:30:2組卷：5引用：4難度：0.7

  • 菁優(yōu)網(wǎng)2．圖示PIJ702是一種常用質(zhì)粒，其中tar為硫鏈絲菌素（一種抗生素）抗性基因；mel為黑色素合成基因，其表達(dá)能使白色的鏈霉菌菌落變成黑色菌落；而三種限制酶SacⅠ、SphⅠ、BglⅡ在pIJ702上分別只有一處識別序列?；卮鹣铝袉栴}。
    表1
    pU702pZHZ8
    BglI5.7kb6.7kb
    表2
    固體培養(yǎng)基中硫鏈絲菌素濃度（ug/mL） 0 1 2 5 10
    不含質(zhì)粒的鏈霉菌生長狀況 +++++ +++ + - -
    +表示生長；-表示不生長。
    （1）限制性核酸內(nèi)切酶可以識別雙鏈DNA中特定核苷酸序列，并使每條鏈中特定部位的兩個核苷酸之間的
     
    斷裂，切割形成的末端有
     
    兩種。
    （2）以SacⅠ和SphⅠ切取目的基因，與質(zhì)粒pIJ702上長度為0.4kb的SacⅠ/SphⅠ片段進(jìn)行置換，構(gòu)建重組質(zhì)粒pZHZ8。上述兩種質(zhì)粒經(jīng)限制酶BglⅡ酶切后所得片段長度見表1。由此判斷目的基因的片段長度為
     
    kb,判定目的基因中含有一個BglⅡ切割位點(diǎn)的理由是
     
    。
    （3）導(dǎo)入目的基因時，首先用Ca2+處理鏈霉菌使其成為感受態(tài)細(xì)胞，再將重組質(zhì)粒pZHZ8溶于緩沖液中與感受態(tài)細(xì)胞混合，在一定的溫度下可以促進(jìn)鏈霉菌完成
     
    過程。
    （4）不含質(zhì)粒的鏈霉菌在含硫鏈絲菌素的固體培養(yǎng)基上生長狀況如表2所示。若要篩選導(dǎo)入pZHZ8的鏈霉菌細(xì)胞，所需硫鏈絲菌素濃度至少應(yīng)在
     
    μg/mL以上，挑選成功導(dǎo)入pZHZ8的鏈霉菌的具體方法是
     
    。若要檢測整合到染色體DNA上的目的基因是否發(fā)揮功能作用，第一步需檢測受體細(xì)胞的
     
    （填“DNA”或“RNA”），檢測方法應(yīng)采用
     
    技術(shù)。

    發(fā)布：2024/11/5 22:30:2組卷：21引用：3難度：0.6

  • 3．我國科學(xué)家利用蘇云金桿菌中的Bt基因培育出轉(zhuǎn)基因抗蟲棉，下列說法錯誤的是（　?。?/h2>

    發(fā)布：2024/11/4 19:0:2組卷：1引用：1難度：0.7
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