X基因存在于水稻基因組中，僅在體細胞（2n）和精子中正常表達，但在卵細胞中不轉(zhuǎn)錄。為研究X基因表達對卵細胞的影響，設計了如圖1所示實驗?；卮鹣铝袉栴}：

（1）科研工作者從水稻體細胞或精子中提取RNA，構(gòu)建

cDNA（或部分基因）

cDNA（或部分基因）

文庫，進而獲得X基因編碼蛋白的序列。
（2）為使X基因能在卵細胞中成功表達，需在基因表達載體中插入

可在水稻卵細胞中啟動X基因轉(zhuǎn)錄的啟動子（和終止子）

可在水稻卵細胞中啟動X基因轉(zhuǎn)錄的啟動子（和終止子）

。將重組質(zhì)粒導入水稻愈傷組織細胞，最常用的方法是

農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法

農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法

。
（3）為篩選出含有重組質(zhì)粒的菌落，需采用含有不同抗生素的平板進行篩選。符合要求的菌落在只含潮霉素、只含卡那霉素、含潮霉素和卡那霉素三種培養(yǎng)基中的生長情況分別為

不生長、生長、不生長

不生長、生長、不生長

（填“生長”或“不生長”）。
（4）為鑒定篩選出的菌落中是否含有正確插入目的基因的重組質(zhì)粒，擬設計引物進行PCR鑒定。PCR反應體系中除含緩沖液、模板DNA、dNTP（包含dATP、dCTP、dGTP、dTTP）、引物以外，還應含有

Taq酶（或耐高溫的DNA聚合酶）

Taq酶（或耐高溫的DNA聚合酶）

；圖2所示為甲、乙、丙3條引物在正確重組質(zhì)粒片段中的相應位置，PCR鑒定時應選擇的一對引物是

甲、乙

甲、乙

。某學生從某一菌落的質(zhì)粒中擴增出了400bp片段，則該菌落中含有的質(zhì)粒

不是

不是

（填“是”或“不是”）正確插入目的基因的重組質(zhì)粒。
（5）從轉(zhuǎn)基因植株未成熟種子中分離出胚，觀察到細胞內(nèi)僅含一個染色體組，判定該胚是由未受精的卵細胞發(fā)育形成的，而非轉(zhuǎn)基因水稻卵細胞在未受精時不能發(fā)育，由此表明

X基因在卵細胞成功表達能使卵細胞不經(jīng)受精直接發(fā)育成胚

X基因在卵細胞成功表達能使卵細胞不經(jīng)受精直接發(fā)育成胚

。