PCR技術(shù)是一種用于放大擴增特定的DNA片段的分子生物學技術(shù)，其最大的特點是能將微量的DNA大幅增加。
Ⅰ.果已知一小段DNA的序列，可采用PCR的方法，簡捷地分析出已知序列兩側(cè)的序列，具體流程如圖1（以EcoRⅠ酶切為例）所示。
（1）步驟Ⅱ中所用的DNA連接酶的作用是催化形成 磷酸二酯鍵磷酸二酯鍵，從而形成環(huán)狀DNA。
（2）步驟Ⅲ中的復(fù)性溫度設(shè)定是成敗的關(guān)鍵，溫度過高會破壞 兩種引物與模板單鏈兩種引物與模板單鏈的堿基配對。
（3）若如表所列為已知的DNA序列和設(shè)計的一些PCR引物，步驟Ⅲ選用的PCR引物必須是 ③和④③和④（填數(shù)字“①、②、③、④”）。
| DNA序列（虛線處省略了部分核苷酸序列） | |
| 已知序列 |
|
| PCR引物 |
|
（4）新冠病毒核酸定性檢測原理：先以病毒RNA為模板利用
逆轉(zhuǎn)錄
逆轉(zhuǎn)錄
酶合成cDNA，再通過PCR技術(shù)擴增相應(yīng)的DNA片段，然后在擴增產(chǎn)物中加入特異的核酸探針。如果檢測到特異的雜交分子則核酸檢測為陽性。此方法為RT-PCR技術(shù)。（5）如果探針是帶有熒光標記的，即為“實時熒光RT-PCR技術(shù)”。在PCR反應(yīng)體系中，加入的熒光探針與模板DNA的某條鏈互補結(jié)合，探針完整時，報告熒光基團發(fā)射的熒光信號被淬滅熒光基團吸收。當子鏈延伸至探針處，探針被TaqDNA聚合酶降解，使報告熒光基團和淬滅熒光基團分離，從而發(fā)出熒光（如圖2所示）。即每擴增1個DNA分子，就有1個熒光分子形成，實現(xiàn)了熒光信號的累積與PCR產(chǎn)物形成完全同步。
①若最初該反應(yīng)體系中只有1個DNA分子模板，進行第4次循環(huán)時，需要消耗熒光探針
8
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個。②檢測時，熒光強度一般要達到或超過閾值才能確診。若檢測出現(xiàn)假陰性，推測可能的一個原因
取樣不規(guī)范導致所獲樣本量不足；樣本運輸中出現(xiàn)了損壞；檢測樣本被污染；病毒相應(yīng)關(guān)鍵序列發(fā)生了改變等
取樣不規(guī)范導致所獲樣本量不足；樣本運輸中出現(xiàn)了損壞；檢測樣本被污染；病毒相應(yīng)關(guān)鍵序列發(fā)生了改變等
。【考點】基因工程的操作過程綜合；DNA片段的擴增與電泳鑒定．
【答案】磷酸二酯鍵；兩種引物與模板單鏈；③和④；逆轉(zhuǎn)錄；8；取樣不規(guī)范導致所獲樣本量不足；樣本運輸中出現(xiàn)了損壞；檢測樣本被污染；病毒相應(yīng)關(guān)鍵序列發(fā)生了改變等
【解答】
【點評】
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發(fā)布：2024/6/27 10:35:59組卷：22引用：1難度：0.6
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（1）基因工程中所用的目的基因可以人工合成，也可以從基因文庫中獲得?；蛭膸彀?和。
（2）生物體細胞內(nèi)的DNA復(fù)制開始時，解開DNA雙鏈的酶是。在體外利用PCR技術(shù)擴增目的基因時，使反應(yīng)體系中的模板DNA解鏈為單鏈的條件是。上述兩個解鏈過程的共同點是破壞了DNA雙鏈分子中的。
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