科學(xué)家從土壤菌株A、B中分離到同源性為93%的Bt1、Bt2抗蟲基因的編碼序列，運(yùn)用交錯(cuò)延伸PCR技術(shù)獲得了抗蟲性能強(qiáng)的重組Bt基因，轉(zhuǎn)入煙草獲得成功，過程如圖所示。
注：①交錯(cuò)延伸PCR：基因Bt1和Bt2均作為模板，所需引物相同，圖中僅示其中一條鏈的延伸情況。
②EcoRI限制酶的識(shí)別序列及切點(diǎn)：5'-G↓AATTC-3'
③啟動(dòng)子Prla可在煙草葉肉細(xì)胞中特異性啟動(dòng)基因的轉(zhuǎn)錄
④圖中生長(zhǎng)素合成酶基因是通過成熟mRNA逆轉(zhuǎn)錄獲得的DNA片段，可使植物細(xì)胞合成生長(zhǎng)素。
⑤抗草甘膦基因（oroA）正常表達(dá)可使植物對(duì)除草劑草甘膦有較好抗性；抗卡那霉素基因（Kanr）正常表達(dá)可使細(xì)菌對(duì)卡那霉素有較好抗性。
（1）若用EcoRI和限制酶XmaI（5'-G↓CCGGG-3'）雙酶切多個(gè)目的基因，隨機(jī)連接 不能不能（填“能”或“不能”）避免兩個(gè)目的基因連接成環(huán)。圖中所示Ti質(zhì)粒部分至少含有 33個(gè)啟動(dòng)子，復(fù)制原點(diǎn)是 解旋解旋酶識(shí)別和結(jié)合的位點(diǎn)。
（2）在培養(yǎng)愈傷組織的培養(yǎng)基中添加 草甘膦草甘膦可以篩選含有Bt重組基因的細(xì)胞。圖中生長(zhǎng)素合成酶基因 不能不能（能/否）促進(jìn)愈傷組織生根？作出解釋 因?yàn)樯L(zhǎng)素合成酶基因是通過成熟mRNA逆轉(zhuǎn)錄獲得的編碼區(qū)序列，自身無啟動(dòng)子，而啟動(dòng)子Prla在愈傷組織細(xì)胞中不能啟動(dòng)轉(zhuǎn)錄因?yàn)樯L(zhǎng)素合成酶基因是通過成熟mRNA逆轉(zhuǎn)錄獲得的編碼區(qū)序列，自身無啟動(dòng)子，而啟動(dòng)子Prla在愈傷組織細(xì)胞中不能啟動(dòng)轉(zhuǎn)錄。
（3）已知交錯(cuò)延伸PCR中所用引物片段均為30個(gè)核苷酸，TaqDNA聚合酶在72℃下的擴(kuò)增速度為1000個(gè)堿基/min,本實(shí)驗(yàn)的循環(huán)擴(kuò)增條件為：95℃變性30s,50℃復(fù)性15s,72℃延伸15s,共80個(gè)循環(huán)。第二輪循環(huán)后所得重組型子鏈長(zhǎng)度為 530530個(gè)核苷酸。若將復(fù)性溫度調(diào)成55℃，則無法得到擴(kuò)增產(chǎn)物，原因是 引物分子無法與模板DNA結(jié)合引物分子無法與模板DNA結(jié)合。通過交錯(cuò)延伸PCR獲得的重組Bt基因，同時(shí)具有Bt1和Bt2基因序列的原因是 第一輪以Bt1（Bt2）為模板合成的子鏈片段在第二輪復(fù)制時(shí)作為引物結(jié)合到Bt2（Bt1）的模板上繼續(xù)合成子鏈，經(jīng)多輪交錯(cuò)循環(huán)擴(kuò)增，可以使產(chǎn)物同時(shí)含有兩種基因的序列第一輪以Bt1（Bt2）為模板合成的子鏈片段在第二輪復(fù)制時(shí)作為引物結(jié)合到Bt2（Bt1）的模板上繼續(xù)合成子鏈，經(jīng)多輪交錯(cuò)循環(huán)擴(kuò)增，可以使產(chǎn)物同時(shí)含有兩種基因的序列。
【考點(diǎn)】基因工程的操作過程綜合；植物的組織培養(yǎng)．
【答案】不能；3；解旋；草甘膦；不能；因?yàn)樯L(zhǎng)素合成酶基因是通過成熟mRNA逆轉(zhuǎn)錄獲得的編碼區(qū)序列，自身無啟動(dòng)子，而啟動(dòng)子Prla在愈傷組織細(xì)胞中不能啟動(dòng)轉(zhuǎn)錄；530；引物分子無法與模板DNA結(jié)合；第一輪以Bt1（Bt2）為模板合成的子鏈片段在第二輪復(fù)制時(shí)作為引物結(jié)合到Bt2（Bt1）的模板上繼續(xù)合成子鏈，經(jīng)多輪交錯(cuò)循環(huán)擴(kuò)增，可以使產(chǎn)物同時(shí)含有兩種基因的序列
【解答】
【點(diǎn)評(píng)】
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發(fā)布：2024/6/27 10:35:59組卷：27引用：1難度：0.6
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1．下列有關(guān)基因工程技術(shù)和蛋白質(zhì)工程技術(shù)敘述正確的是（ ?。?/h2>
發(fā)布：2025/1/5 8:0:1組卷：6引用：1難度：0.7 -
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3．幾丁質(zhì)是許多真菌細(xì)胞壁的重要成分，幾丁質(zhì)酶可催化幾丁質(zhì)水解。通過基因工程將幾丁質(zhì)酶基因轉(zhuǎn)入植物體內(nèi)，可增強(qiáng)其抗真菌病的能力?；卮鹣铝袉栴}：
（1）基因工程中所用的目的基因可以人工合成，也可以從基因文庫中獲得?；蛭膸彀?和。
（2）生物體細(xì)胞內(nèi)的DNA復(fù)制開始時(shí)，解開DNA雙鏈的酶是。在體外利用PCR技術(shù)擴(kuò)增目的基因時(shí)，使反應(yīng)體系中的模板DNA解鏈為單鏈的條件是。上述兩個(gè)解鏈過程的共同點(diǎn)是破壞了DNA雙鏈分子中的。
（3）DNA連接酶是將兩個(gè)DNA片段連接起來的酶，常見的有和，其中既能連接黏性末端又能連接平末端的是。當(dāng)幾丁質(zhì)酶基因和質(zhì)粒載體連接時(shí)，DNA連接酶催化形成的化學(xué)鍵是。
（4）提取RNA時(shí)，提取液中需添加RNA酶抑制劑，其目的是。
（5）若獲得的轉(zhuǎn)基因植株（幾丁質(zhì)酶基因已經(jīng)整合到植物的基因組中）抗真菌病的能力沒有提高，根據(jù)中心法則分析，其可能的原因是。發(fā)布：2025/1/5 8:0:1組卷：2引用：2難度：0.6
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