某研究所以馬尾藻巖藻聚糖(SF)為研究對象,體外培養(yǎng)小鼠肉瘤細胞S180,做抗腫瘤活性實驗的研究。下列為部分實驗步驟與結(jié)果。
實驗步驟:
①將S180腫瘤細胞以RPMI1640為營養(yǎng)液,在5%CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。
②將上述培養(yǎng)過的S180腫瘤細胞經(jīng)酶消化,按1×103~1×105個?mL-1接種到96孔培養(yǎng)板,適宜條件下培養(yǎng)24h、48h、72h、96h后,以MTT法(又稱比色法,一種檢測細胞存活和生長的方法)于波長490nm處測定OD值,結(jié)果如圖1。
③在適宜的培養(yǎng)條件和恰當?shù)腟180腫瘤細胞接種濃度下,研究不同濃度(0 mg?mL-1、0.1 mg?mL-1、0.5 mg?mL-1、1 mg?mL-1、2 mg?mL-1、4 mg?mL-1、8 mg?mL-1、10 mg?mL-1、15 mg?mL-1、20 mg?mL-1、25 mg?mL-1、30 mg?mL-1)的SF對S180腫瘤細胞增殖的抑制情況,96h后以MTT法于波長490nm處測定OD值,結(jié)果如圖2。
請回答下列問題:
(1)步驟①中以RPMI1640為培養(yǎng)液培養(yǎng)S180腫瘤細胞的原理是 細胞增殖細胞增殖。培養(yǎng)液中除細胞所需的營養(yǎng)物質(zhì)之外,通常還添加一定量的 抗生素抗生素,以防培養(yǎng)過程中的污染。
(2)步驟②中“消化”所使用的酶是 胰蛋白酶(或膠原蛋白酶)胰蛋白酶(或膠原蛋白酶),為減少OD值測定的誤差,應注意 多測量,取平均值多測量,取平均值。
(3)已知在一定細胞數(shù)目范圍內(nèi),MTT法測得的OD值與活細胞數(shù)量呈正相關(guān),由圖1可知步驟③中恰當?shù)腟180腫瘤細胞接種濃度為 5×1035×103個?mL-1。
(4)圖2實驗結(jié)果表明,在一定范圍內(nèi)SF濃度與細胞增殖的抑制作用呈 正相關(guān)正相關(guān)(填“正相關(guān)”或“負相關(guān)”),當SF濃度達到 2525mg?mL-1時細胞增殖的抑制作用達到極限,繼續(xù)增加SF濃度對細胞增殖的抑制作用變化不明顯。
【答案】細胞增殖;抗生素;胰蛋白酶(或膠原蛋白酶);多測量,取平均值;5×103;正相關(guān);25
【解答】
【點評】
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