U-mir是家蠶體內(nèi)的一種小分子非編碼RNA，可與某些RNA尾端的一段非編碼序列（3'-UTR）結(jié)合，進(jìn)而影響基因的表達(dá)。為探究U-mir是否影響家蠶基因B（調(diào)控家蠶眼睛發(fā)育）的表達(dá)，科研人員將基因B中對(duì)應(yīng)3'-UTR的DNA片段與熒光素酶基因（U-mir不影響熒光素酶基因的表達(dá)）重組后導(dǎo)入家蠶胚胎細(xì)胞觀察其表達(dá)結(jié)果。請(qǐng)回答下列問題：
（1）利用PCR技術(shù)擴(kuò)增基因B對(duì)應(yīng)3'-UTR的DNA片段，應(yīng)先依據(jù)該基因的一段核苷酸序列合成
引物
引物
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（2）利用 限制酶（或限制性內(nèi)切核酸酶）和DNA連接酶
限制酶（或限制性內(nèi)切核酸酶）和DNA連接酶
（填酶的種類）可將上述DNA片段插入熒光素酶基因表達(dá)載體（如圖1）上的 2
2
位點(diǎn)，構(gòu)建重組載體。
（3）將重組載體與U-mir共同導(dǎo)入家蠶胚胎細(xì)胞，同時(shí)應(yīng)設(shè)置兩個(gè)對(duì)照組，即將 熒光素酶基因表達(dá)載體
熒光素酶基因表達(dá)載體
、重組載體
重組載體
分別導(dǎo)入兩組家蠶胚胎細(xì)胞。
（4）科研人員分別從實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組細(xì)胞中提取蛋白質(zhì)，經(jīng)處理檢測(cè)后獲得相對(duì)熒光值（在適宜條件下，熒光素酶可催化熒光素發(fā)生氧化反應(yīng)并發(fā)出熒光），其結(jié)果如圖2。
依據(jù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果可推斷：U-mir影響基因B的表達(dá)
U-mir影響基因B的表達(dá)
。分析可能原因：U-mir與基因B所轉(zhuǎn)錄的mRNA的3'-UTR（根據(jù)堿基互補(bǔ)配對(duì)原則）結(jié)合，進(jìn)而抑制基因B的表達(dá)（翻譯過程）
U-mir與基因B所轉(zhuǎn)錄的mRNA的3'-UTR（根據(jù)堿基互補(bǔ)配對(duì)原則）結(jié)合，進(jìn)而抑制基因B的表達(dá)（翻譯過程）
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