IKK激酶參與動(dòng)物體內(nèi)免疫細(xì)胞的分化。臨床上發(fā)現(xiàn)某重癥聯(lián)合免疫缺陷(SCID)患兒IKK基因編碼區(qū)第1183位堿基T突變?yōu)镃,導(dǎo)致IKK上第395位酪氨酸被組氨酸代替。為研究該患兒發(fā)病機(jī)制,研究人員利用純合野生鼠應(yīng)用大引物PCR定點(diǎn)誘變技術(shù)培育出SCID模型小鼠(純合),主要過(guò)程如圖甲、乙、分析回答下列問(wèn)題:
?
(1)在圖甲獲取突變基因過(guò)程中,需要以下3種引物:
引物A | 5′-CCCAACCGGAAAGTGTCA-3′ (下劃線(xiàn)字母為突變堿基) |
引物B | 5′-TAAGCTTCGAACATCCTA-3′ (下劃線(xiàn)部分為限制酶HindⅢ識(shí)別序列) |
引物C | 5′-GTGAGCTCGCTGCCCCAA-3′(下劃線(xiàn)部分為限制酶SacⅠ識(shí)別序列) |
引物A和引物B
引物A和引物B
,PCR2中使用的引物有 引物C
引物C
和圖中大引物的 ②
②
(填“①”或“②”)鏈。(2)將突變基因?qū)胄∈笫芫炎钣行У姆椒ㄊ?
顯微注射法
顯微注射法
。(3)研究人員經(jīng)鑒定、篩選獲得一只轉(zhuǎn)基因雜合鼠F0,并確認(rèn)突變基因已經(jīng)穩(wěn)定同源替代IKK基因。利用雜交鼠F,通過(guò)雜交獲得SCID模型鼠,請(qǐng)將實(shí)驗(yàn)步驟補(bǔ)充完整;
①雜交親本:
F0×野生鼠
F0×野生鼠
,雜交得F1;②
F1雌雄鼠隨機(jī)交配
F1雌雄鼠隨機(jī)交配
得F2;③提取F2每只小鼠的基因組DNA,采用分子生物學(xué)方法,利用IKK基因探針和突變基因探針進(jìn)行篩選,則
IKK基因探針檢測(cè)未出現(xiàn)雜交帶,突變基因探針檢測(cè)出現(xiàn)雜交帶
IKK基因探針檢測(cè)未出現(xiàn)雜交帶,突變基因探針檢測(cè)出現(xiàn)雜交帶
的為模型鼠。【考點(diǎn)】DNA片段的擴(kuò)增與電泳鑒定.
【答案】引物A和引物B;引物C;②;顯微注射法;F0×野生鼠;F1雌雄鼠隨機(jī)交配;IKK基因探針檢測(cè)未出現(xiàn)雜交帶,突變基因探針檢測(cè)出現(xiàn)雜交帶
【解答】
【點(diǎn)評(píng)】
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發(fā)布:2024/8/19 9:0:1組卷:13引用:2難度:0.5
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1.以下是有關(guān)分離與鑒別DNA的技術(shù),其中說(shuō)法正確的是( ?。?/h2>
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2.科研人員克隆了豬白細(xì)胞抗原基因(SLA-2基因),構(gòu)建了該基因的真核表達(dá)載體,進(jìn)行了豬腎上皮細(xì)胞表達(dá)研究。實(shí)驗(yàn)的主要流程如圖1,SLA-2基因長(zhǎng)度為1100bp,質(zhì)粒B的總長(zhǎng)度為4445bp,其限制酶切點(diǎn)后的數(shù)字表示距復(fù)制原點(diǎn)的距離。請(qǐng)回答:
限制酶 BclⅠ NotⅠ XbaⅠ San3AⅠ 識(shí)別序列及切割位點(diǎn) T↓GATCA GC↓GGCCGC T↓CTAGA ↓GATC
a 5'-GCTCTAGAATGCGGGTCAGGGGCCCTCAAGCCATCCTC
b 5'-GTTGCGGCCGCTCACACTCTAGGATCCTTGGTAAGGGACAC
c 5'-GCGATCATGCGGGTCAGGGGCCCTCAAGCCATCCTC
d 5'-GTTTGATCACTCACACTCTAGGATCCTTGGTAAGGGACAC
(2)過(guò)程②將重組質(zhì)粒導(dǎo)入大腸桿菌的目的是
(3)若用Sau3AⅠ和XbaⅠ完全酶切質(zhì)粒C后電泳,請(qǐng)?jiān)诖痤}紙相應(yīng)位置畫(huà)出可能得到的電泳條帶。
(4)科研中常用呤霉素對(duì)真核細(xì)胞進(jìn)行篩選,一般選擇最低致死濃度的前一個(gè)濃度作為篩選濃度的原因是:既可以讓大部分沒(méi)有抗性的細(xì)胞死亡又不會(huì)讓
(5)過(guò)程⑦研究人員用小鼠抗SLA抗原肽單克隆抗體檢測(cè)腎上皮細(xì)胞生產(chǎn)的抗原肽,其原理是發(fā)布:2024/12/15 6:30:1組卷:42引用:3難度:0.6 -
3.下列關(guān)于“DNA片段的擴(kuò)增及電泳鑒定”的實(shí)驗(yàn),說(shuō)法錯(cuò)誤的是( )
發(fā)布:2024/12/15 6:30:1組卷:3引用:1難度:0.6
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