普通番茄細(xì)胞中含有多聚半乳糖醛酸酶基因，控制細(xì)胞產(chǎn)生多聚半乳糖醛酸酶，該酶能破壞細(xì)胞壁，使番茄軟化，不耐貯藏?？茖W(xué)家將抗多聚半乳糖醛酸酶基因?qū)敕鸭?xì)胞，培育出了抗軟化、保鮮時間長的轉(zhuǎn)基因番茄。目的基因和質(zhì)粒（含卡那霉素抗性基因Km^R）上有 PstⅠ、SmaⅠ、HindⅢ、AluⅠ四種限制酶切割位點，操作流程如下圖所示。請分析回答下列問題：

（1）本實驗的目的基因指的是

抗多聚半乳糖醛酸酶基因

抗多聚半乳糖醛酸酶基因

，在構(gòu)建重組質(zhì)粒時，為了確保目的基因和質(zhì)粒定向連接，應(yīng)該選用的限制酶是

SmaⅠ和PstⅠ

SmaⅠ和PstⅠ

。若用 PstⅠ和AluⅠ切割重組質(zhì)粒，則完全酶切后將會出現(xiàn)

3

3

個序列不同的DNA片段。
（2）要利用培養(yǎng)基篩選已導(dǎo)入目的基因的番茄細(xì)胞，培養(yǎng)基中應(yīng)加入

卡那霉素

卡那霉素

。圖中步驟①→②所示技術(shù)的生物學(xué)原理是

細(xì)胞的全能性

細(xì)胞的全能性

。
（3）據(jù)圖中轉(zhuǎn)基因番茄細(xì)胞中的信息傳遞過程可知，由于

mRNA1和mRNA2相結(jié)合

mRNA1和mRNA2相結(jié)合

而直接阻礙了多聚半乳糖醛酸酶基因表達(dá)時的

翻譯

翻譯

過程，最終使番茄獲得抗軟化的性狀。
（4）如果利用上述方法培育出的番茄不具抗軟化性狀，經(jīng)分子雜交技術(shù)檢測，發(fā)現(xiàn)細(xì)胞內(nèi)有目的基因存在，但檢測不到mRNA1分子，可能原因是目的基因上游缺少

啟動子

啟動子

。