請(qǐng)根據(jù)“血紅蛋白的提取和分離”實(shí)驗(yàn),回答下列問(wèn)題:
(1)血紅蛋白因含有
血紅素
血紅素
(該物質(zhì)中含F(xiàn)e2+)而呈紅色,這有利于對(duì)提取過(guò)程進(jìn)行監(jiān)測(cè)。
(2)在進(jìn)行樣品處理時(shí)首先要使用 生理鹽水
生理鹽水
對(duì)紅細(xì)胞進(jìn)行洗滌。在該過(guò)程中,若 離心速度過(guò)高和時(shí)間過(guò)長(zhǎng)
離心速度過(guò)高和時(shí)間過(guò)長(zhǎng)
會(huì)使白細(xì)胞一同沉淀,達(dá)不到分離的效果。
(3)將洗滌好的紅細(xì)胞倒入燒杯中,加入 蒸餾水和甲苯
蒸餾水和甲苯
使紅細(xì)胞破裂,釋放出血紅蛋白,再通過(guò)離心的方法將血紅蛋白從混合液中分離出來(lái)。
(4)將收集的血紅蛋白溶液放在透析袋中進(jìn)行透析,透析的原理是 透析袋能使小分子自由進(jìn)出,而將大分子保留在袋內(nèi)
透析袋能使小分子自由進(jìn)出,而將大分子保留在袋內(nèi)
。
(5)通過(guò)凝膠色譜法將樣品進(jìn)一步純化。裝填色譜柱時(shí)不能有氣泡存在,因?yàn)?氣泡會(huì)攪亂洗脫液中蛋白質(zhì)的洗脫次序
氣泡會(huì)攪亂洗脫液中蛋白質(zhì)的洗脫次序
降低分離效果。
(6)最后經(jīng)SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳進(jìn)行純度鑒定。加入 SDS可以使蛋白質(zhì)在聚丙烯酰胺凝膠中的遷移率完全取決于 分子的大小
分子的大小
。
(7)本實(shí)驗(yàn)用的是交聯(lián)葡聚糖凝膠(Sephadex G-75),其中“75”表示 凝膠得水值
凝膠得水值
,即每克凝膠膨脹時(shí)吸收水分7.5g。