透明顫菌血紅蛋白基因vgb表達(dá)產(chǎn)物VHb蛋白能使其在低氧的環(huán)境中生長良好。頂頭孢霉是好氧性真菌，其發(fā)酵產(chǎn)物頭孢菌素C有很大的市場需求量，但低氧環(huán)境影響其產(chǎn)量，傳統(tǒng)發(fā)酵生產(chǎn)的增氧成本高。為提高產(chǎn)量科研人員將透明顫菌血紅蛋白基因vgb基因和頂頭孢霉pcpC啟動子進(jìn)行PCR拼接，并與質(zhì)粒1構(gòu)建重組質(zhì)粒，如圖。
注：hph是潮霉素抗性基因，Vgb基因與hph基因共用終止子。
回答下列問題：
（1）PCR過程需要設(shè)計引物，引物的作用是 使DNA聚合酶能夠從引物的3’端開始連接脫氧核苷酸使DNA聚合酶能夠從引物的3’端開始連接脫氧核苷酸。
（2）據(jù)圖所示，重疊延伸PCR拼接時，若啟動子啟動方向與引物3延伸方向一致，引物2和引物3的5′端需分別添加 XbaⅠ、BamⅠXbaⅠ、BamⅠ序列。拼接形成重組基因的目的是 使頂頭孢霉在低氧的環(huán)境中生長良好，提高其發(fā)酵產(chǎn)物頭孢菌素C的產(chǎn)量使頂頭孢霉在低氧的環(huán)境中生長良好，提高其發(fā)酵產(chǎn)物頭孢菌素C的產(chǎn)量。
（3）利用含有 潮霉素潮霉素的選擇培養(yǎng)基篩選菌種，最后從個體生物學(xué)水平上鑒定，若 在低氧環(huán)境下，檢測到頭孢菌素C表達(dá)量增多在低氧環(huán)境下，檢測到頭孢菌素C表達(dá)量增多，則表示轉(zhuǎn)化成功。
（4）為驗(yàn)證轉(zhuǎn)化成功的重組菌株遺傳穩(wěn)定性，可將菌株在 不含不含（ 含/不含）潮霉素的液體培養(yǎng)基中連續(xù)轉(zhuǎn)接10代，取第10代菌液采用 稀釋涂布平板法稀釋涂布平板法法接種到 含含（ 含/不含）潮霉素的固體培養(yǎng)基上，若能在固體培養(yǎng)基上生長，表明重組菌株遺傳穩(wěn)定性良好。
【考點(diǎn)】基因工程的操作過程綜合；DNA片段的擴(kuò)增與電泳鑒定．
【答案】使DNA聚合酶能夠從引物的3’端開始連接脫氧核苷酸；XbaⅠ、BamⅠ；使頂頭孢霉在低氧的環(huán)境中生長良好，提高其發(fā)酵產(chǎn)物頭孢菌素C的產(chǎn)量；潮霉素；在低氧環(huán)境下，檢測到頭孢菌素C表達(dá)量增多；不含；稀釋涂布平板法；含
【解答】
【點(diǎn)評】
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發(fā)布：2024/5/12 8:0:9組卷：31引用：2難度：0.6
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