趨化因子能吸引免疫細胞,并刺激它們做出特定免疫反應,稱為趨化性反應。近日,科學家人工改造大腸桿菌使其能夠識別癌細胞表面CD47蛋白,然后利用基因工程將表達趨化因子CXCL16的基因導入具有靶向功能的大腸桿菌中,使其能夠定向轉移至腫瘤細胞并裂解釋放CXCL16招募細胞毒性T細胞攻擊腫瘤細胞,該大腸桿菌菌群被科學界稱為“細菌自殺小隊”。目前該方案已在多種小鼠腫瘤模型(如卵巢癌、腸癌等)中起到良好的治療效果。請回答下列問題。
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(1)圖中將重組質粒導入大腸桿菌,一般先用 Ca2+Ca2+處理大腸桿菌細胞。重組質粒中啟動子的作用是 供RNA聚合酶識別、結合,以驅動目的基因的轉錄供RNA聚合酶識別、結合,以驅動目的基因的轉錄。
(2)為防止DNA片段反向拼接和自身環(huán)化,需用限制酶 BamHⅠ、EcoRⅠBamHⅠ、EcoRⅠ同時處理質粒和含目的基因的外源DNA,并用 DNA連接酶DNA連接酶進行連接。
(3)PCR擴增CXCL16基因(5′-CGAGCTCAAGC???GGTCGCCACCA-3′),需在PCR反應體系中添加一對序列為5′-CGAGCTCAAGC-3′和 BB的引物(請從下列選項中選擇)。
A.5′-GGTCGCCACCA-3′
B.5′-TGGTGGCGACC-3′
C.5′-GCTTGAGCTCG-3′
(4)為確定是否成功培育“細菌自殺小隊”,研究人員將重組大腸桿菌通過靜脈注射至卵巢癌模型小鼠中,一段時間后若卵巢中 檢測到重組大腸桿菌,且卵巢癌細胞死亡檢測到重組大腸桿菌,且卵巢癌細胞死亡,而其他健康器官中幾乎未檢測到重組大腸桿菌的存在,則基本能確定培育成功。
【考點】基因工程的操作過程綜合;DNA片段的擴增與電泳鑒定.
【答案】Ca2+;供RNA聚合酶識別、結合,以驅動目的基因的轉錄;BamHⅠ、EcoRⅠ;DNA連接酶;B;檢測到重組大腸桿菌,且卵巢癌細胞死亡
【解答】
【點評】
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