如圖所示為三種質(zhì)粒和一個(gè)含目的基因的DNA片段示意圖。圖中Ap為氨芐青霉素抗性基因，Tc為四環(huán)素抗性基因，lacZ為藍(lán)色顯色基因（能使含該基因的大腸桿菌菌落呈藍(lán)色）。圖中EcoRⅠ、PvuⅠ為兩種限制酶，括號(hào)內(nèi)的數(shù)字表示限制酶切割位點(diǎn)與復(fù)制原點(diǎn)的距離。請(qǐng)據(jù)圖分析并回答問(wèn)題：
（1）若需獲得圖中目的基因，可選用PvuⅠPvuⅠ限制酶。
（2）片段D是目的基因中的某一片段，下列敘述錯(cuò)誤的有abcabc（填字母）。
a.該圖中含有兩個(gè)密碼子
b.圖中③和④代表兩個(gè)不同的脫氧核苷酸
c.若只用該片段中的3個(gè)堿基對(duì)，可以排列出43種片段
d.DNA聚合酶和DNA連接酶都可作用于②處，解旋酶作用中①處
（3）圖中最適合作為目的基因運(yùn)載體的質(zhì)粒是B，而A、C兩種質(zhì)粒不能作為運(yùn)載體的理由分別是A缺少標(biāo)記基因；質(zhì)粒C在用和目的基因相同的限制酶切割時(shí)，復(fù)制原點(diǎn)會(huì)被限制酶切割，會(huì)影響重組質(zhì)粒的自主復(fù)制A缺少標(biāo)記基因；質(zhì)粒C在用和目的基因相同的限制酶切割時(shí)，復(fù)制原點(diǎn)會(huì)被限制酶切割，會(huì)影響重組質(zhì)粒的自主復(fù)制。
（4）用目的基因和質(zhì)粒B構(gòu)建重組質(zhì)粒后用EcoRⅠ完全酶切并進(jìn)行電泳觀察，可出現(xiàn)長(zhǎng)度為1.1kb和5.65.6kb,或者3.13.1kb和3.63.6kb的片段。（重組質(zhì)粒上目的基因的插入位點(diǎn)與EcoRⅠ的識(shí)別位點(diǎn)之間的堿基對(duì)忽略不計(jì)）
（5）將分別用限制酶PvuⅠ切開(kāi)的質(zhì)粒B溶液與目的基因溶液混合，加入DNA連接酶連接后，并進(jìn)行導(dǎo)入大腸桿菌受體細(xì)胞的操作之后，從菌落的顏色和對(duì)抗生素抗性的角度分析，受體細(xì)胞的類(lèi)型有33種。若菌落表現(xiàn)為具有氨芐青霉素抗性、不呈藍(lán)色，說(shuō)明導(dǎo)入對(duì)應(yīng)受體細(xì)胞的DNA為重組質(zhì)粒（或質(zhì)粒B-目的基因連接）或質(zhì)粒B-質(zhì)粒B反向連接重組質(zhì)粒（或質(zhì)粒B-目的基因連接）或質(zhì)粒B-質(zhì)粒B反向連接。
【考點(diǎn)】基因工程的操作過(guò)程綜合．
【答案】PvuⅠ；abc；A缺少標(biāo)記基因；質(zhì)粒C在用和目的基因相同的限制酶切割時(shí)，復(fù)制原點(diǎn)會(huì)被限制酶切割，會(huì)影響重組質(zhì)粒的自主復(fù)制；5.6；3.1；3.6；3；重組質(zhì)粒（或質(zhì)粒B-目的基因連接）或質(zhì)粒B-質(zhì)粒B反向連接
【解答】
【點(diǎn)評(píng)】
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發(fā)布：2024/4/20 14:35:0組卷：47引用：2難度：0.6
相似題
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1．基因工程技術(shù)又稱為DNA重組技術(shù)，回答相關(guān)問(wèn)題：
（1）在基因工程中，獲取目的基因主要有兩大途徑，即和從中分離．
（2）利用某植物的成熟葉片為材料，同時(shí)構(gòu)建cDNA文庫(kù)和基因組文庫(kù)，兩個(gè)文庫(kù)相比，cDNA文庫(kù)中含有的基因數(shù)目比基因組文庫(kù)中的少，其原因是．
（3）在基因表達(dá)載體中，啟動(dòng)子是聚合酶識(shí)別并結(jié)合的部位．若采用原核生物作為基因表達(dá)載體的受體細(xì)胞，最常用的原核生物是．
（4）將目的基因?qū)胫参锛?xì)胞時(shí)，采用最多的方法是法．發(fā)布：2024/12/29 8:0:2組卷：2引用：1難度：0.3 -
2．科研人員利用大腸桿菌構(gòu)建了抗蟲(chóng)基因文庫(kù)。最新研究發(fā)現(xiàn)漏斗蜘蛛中的AH基因控制合成的毒素肽具有顯著的殺蟲(chóng)效果，現(xiàn)以p-B質(zhì)粒為載體，構(gòu)建 AH基因的cDNA文庫(kù)。圖1表示p-B質(zhì)粒，其中Cm/表示氯霉素抗性基因，cdB 基因表達(dá)產(chǎn)物能抑制大腸桿菌 DNA 復(fù)制。圖中箭頭表示相關(guān)限制酶的酶切位點(diǎn)，且不同種限制酶識(shí)別序列不同，其中AiuI、XbaI、SspI和MfeⅠ識(shí)別的堿基序列和酶切位點(diǎn)分別是 AG'CT、T'CTAGA、AAT'ATT、C'AATTG。請(qǐng)分析并回答下列問(wèn)題：
（1）為獲得AH基因的cDNA，先要從漏斗蜘蛛毒素肽分泌細(xì)胞中提取，再通過(guò)合成出AH基因的cDNA。若從漏斗蜘蛛其他組織細(xì)胞提取，則難以成功，原因是。
（2）若已知AH基因的cDNA兩端部分序列為：5'-AACTATGCGC……CGTAGCCTCT-3'，請(qǐng)寫(xiě)出PCR擴(kuò)增該cDNA時(shí)的兩個(gè)引物對(duì)應(yīng)的局部序列（前10個(gè)堿基序列），并標(biāo)明5'和3'端：，。一個(gè)初始雙鏈cDNA經(jīng)四輪循環(huán)后，共消耗這兩種引物的數(shù)量為個(gè)。
（3）利用圖中的質(zhì)粒和AH基因構(gòu)建重組質(zhì)粒時(shí)，宜選用限制酶雙酶切質(zhì)粒，再選用限制酶切割目的基因，將切割后獲得的DNA片段混合，經(jīng)DNA連接酶處理后，再與大腸桿菌混合培養(yǎng)，在含有適量氯霉素的培養(yǎng)基中添加適量冷的，以促進(jìn)轉(zhuǎn)化。
（4）經(jīng)上述處理培養(yǎng)后，其中能繁殖的大腸桿菌中應(yīng)含有的質(zhì)粒是，原因是。發(fā)布：2024/12/29 8:0:2組卷：8引用：1難度：0.6 -
3．基因治療是指將外源正常基因?qū)氚屑?xì)胞，以糾正或補(bǔ)償因基因缺陷和異常引起的疾病，以達(dá)到治療的目的．干擾素基因缺失的小鼠不能產(chǎn)生成熟淋巴細(xì)胞，科研人員利用胚胎干細(xì)胞（ES細(xì)胞）對(duì)干擾素基因缺失的小鼠進(jìn)行了基因治療．請(qǐng)回答：
（1）為使干擾素基因在小鼠細(xì)胞中高效表達(dá)，需要把來(lái)自cDNA文庫(kù)的干擾素基因片段正確插入基因表達(dá)載體的和之間．
（2）將干擾素基因?qū)隕S細(xì)胞的方法是，采用可以鑒定目的基因是否插入到受體細(xì)胞染色體DNA分子上，再將能正常表達(dá)干擾素的細(xì)胞轉(zhuǎn)入到小鼠體內(nèi)，這種治療方法稱為．導(dǎo)入ES細(xì)胞而不是導(dǎo)入上皮細(xì)胞是因?yàn)镋S細(xì)胞在功能上具有．
（3）干擾素基因缺失的小鼠易患某種細(xì)菌導(dǎo)致的肺炎，引起這種現(xiàn)象的原因是小鼠缺少成熟的淋巴細(xì)胞，降低了小鼠免疫系統(tǒng)的功能．
（4）用于基因治療的基因有三類(lèi)，一類(lèi)是把正?；?qū)胗谢蛉毕莸募?xì)胞中，以表達(dá)出正常性狀來(lái)治療，第二類(lèi)是反義基因，即通過(guò)產(chǎn)生的mRNA分子與病變基因產(chǎn)生的進(jìn)行互補(bǔ)結(jié)合，來(lái)阻斷非正常蛋白質(zhì)的合成；第三類(lèi)是編碼可以殺死癌細(xì)胞的蛋白酶基因．發(fā)布：2024/12/29 8:0:2組卷：24引用：2難度：0.5
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