研究人員開(kāi)展了人乳鐵蛋白基因乳腺特異性表達(dá)載體構(gòu)建及轉(zhuǎn)染研究，主要流程如圖。圖中AseⅠ、NheⅠ、SalⅠ、BamHⅠ代表相關(guān)限制酶切點(diǎn)，neo^r為新霉素抗性基因，BLG基因?yàn)锽乳球蛋白基因，GP基因?yàn)榫G色熒光蛋白基因，請(qǐng)回答下列問(wèn)題：

（1）熒光RT-PCR技術(shù)首先需要逆轉(zhuǎn)錄過(guò)程合成DNA，而后進(jìn)行擴(kuò)增所用的試劑盒中通常都應(yīng)該含有

逆（反）轉(zhuǎn)錄酶

逆（反）轉(zhuǎn)錄酶

、耐高溫的DNA聚合酶、熒光標(biāo)記的核酸探針、引物、dNTP、緩沖體系。過(guò)程①中

不能

不能

（填“能”或“不能”）從人肌肉細(xì)胞中提取RNA用于RT-PCR以獲得hLF基因。在RT-PCR過(guò)程中，加入的引物需在

5′

5′

（填“5′”或“3′”）端添加

SalⅠ和BamHⅠ

SalⅠ和BamHⅠ

（填“AseⅠ”、NheⅠ”、“SalⅠ”、BamHⅠ”）兩種限制酶的識(shí)別序列，便于hLF基因插入pEB中。
（2）過(guò)程②中，為了使人乳鐵蛋白基因在山羊的乳腺細(xì)胞中表達(dá)，最好將hLF基因插入到pEB質(zhì)粒的

BLG

BLG

（填“neo”、“BLG”或“GFP”）基因之后，以使兩個(gè)基因共用一個(gè)調(diào)控元件啟動(dòng)轉(zhuǎn)錄。
（3）過(guò)程③依據(jù)的主要原理是

生物膜具流動(dòng)性

生物膜具流動(dòng)性

，使脂質(zhì)體與山羊乳腺上皮細(xì)胞融合，可以將重組質(zhì)粒導(dǎo)入受體細(xì)胞。
（4）若將轉(zhuǎn)染后的山羊乳腺上皮細(xì)胞先置于含新霉素的培養(yǎng)液中培養(yǎng)，再利用熒光顯微鏡觀察到山羊乳腺上皮細(xì)胞中發(fā)出綠色熒光，該現(xiàn)象并不能區(qū)分普通質(zhì)?；蛑亟M質(zhì)粒，理由是

普通質(zhì)粒和重組質(zhì)粒上都有新霉素抗性基因和綠色熒光蛋白基因

普通質(zhì)粒和重組質(zhì)粒上都有新霉素抗性基因和綠色熒光蛋白基因

。故接下來(lái)可采用

PCR\電泳\分子雜交等

PCR\電泳\分子雜交等

技術(shù)檢驗(yàn)基因是否成功轉(zhuǎn)錄。