新冠疫苗有多種，包括滅活疫苗、腺病毒載體疫苗、重組亞單位疫苗和核酸疫苗等。如圖為其中一種疫苗的研發(fā)思路，圖中①～⑦表示過程，箭頭表示NcoⅠ、SphⅠ、NheⅠ、BamHⅠ的酶切位點（四種酶的識別序列詳見表），標記基因SUC2控制合成蔗糖酶，使P型酵母菌能利用培養(yǎng)基中的蔗糖生存。
| 限制酶 | NcoⅠ | SphⅠ | NheⅠ | BamHⅠ |
| 識別序列和切割位點 | C↓CATGG | CCATG↓C | G↓GATCC | G↓CTAGC |
（1）圖中①過程需要使用逆轉(zhuǎn)錄酶先得到cDNA，再使用
PCR
PCR
技術(shù)擴增得到S基因。完成以后，常采用 瓊脂糖凝膠電泳
瓊脂糖凝膠電泳
鑒定擴增產(chǎn)物。（2）為使③過程順利進行，需先使用限制酶
NcoⅠ
NcoⅠ
和 NheⅠ
NheⅠ
切割質(zhì)粒B，選用兩種限制酶對新冠病毒的S基因進行切割的目的是 防止S基因自身環(huán)化（防止載體自身環(huán)化、防止S基因與載體反向連接）
防止S基因自身環(huán)化（防止載體自身環(huán)化、防止S基因與載體反向連接）
（答出一點即可）。（3）圖中表示篩選的過程是⑤，為達到利用標記基因篩選的目的，普通的P型酵母菌應(yīng)該滿足的條件是
不能合成蔗糖酶，無法利用培養(yǎng)基中的蔗糖生存
不能合成蔗糖酶，無法利用培養(yǎng)基中的蔗糖生存
。【考點】基因工程的操作過程綜合．
【答案】PCR；瓊脂糖凝膠電泳；NcoⅠ；NheⅠ；防止S基因自身環(huán)化（防止載體自身環(huán)化、防止S基因與載體反向連接）；不能合成蔗糖酶，無法利用培養(yǎng)基中的蔗糖生存
【解答】
【點評】
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發(fā)布：2024/8/3 8:0:9組卷：4引用：2難度：0.5
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1．科研人員利用大腸桿菌構(gòu)建了抗蟲基因文庫。最新研究發(fā)現(xiàn)漏斗蜘蛛中的AH基因控制合成的毒素肽具有顯著的殺蟲效果，現(xiàn)以p-B質(zhì)粒為載體，構(gòu)建 AH基因的cDNA文庫。圖1表示p-B質(zhì)粒，其中Cm/表示氯霉素抗性基因，cdB 基因表達產(chǎn)物能抑制大腸桿菌 DNA 復(fù)制。圖中箭頭表示相關(guān)限制酶的酶切位點，且不同種限制酶識別序列不同，其中AiuI、XbaI、SspI和MfeⅠ識別的堿基序列和酶切位點分別是 AG'CT、T'CTAGA、AAT'ATT、C'AATTG。請分析并回答下列問題：
（1）為獲得AH基因的cDNA，先要從漏斗蜘蛛毒素肽分泌細胞中提取，再通過合成出AH基因的cDNA。若從漏斗蜘蛛其他組織細胞提取，則難以成功，原因是。
（2）若已知AH基因的cDNA兩端部分序列為：5'-AACTATGCGC……CGTAGCCTCT-3'，請寫出PCR擴增該cDNA時的兩個引物對應(yīng)的局部序列（前10個堿基序列），并標明5'和3'端：，。一個初始雙鏈cDNA經(jīng)四輪循環(huán)后，共消耗這兩種引物的數(shù)量為個。
（3）利用圖中的質(zhì)粒和AH基因構(gòu)建重組質(zhì)粒時，宜選用限制酶雙酶切質(zhì)粒，再選用限制酶切割目的基因，將切割后獲得的DNA片段混合，經(jīng)DNA連接酶處理后，再與大腸桿菌混合培養(yǎng)，在含有適量氯霉素的培養(yǎng)基中添加適量冷的，以促進轉(zhuǎn)化。
（4）經(jīng)上述處理培養(yǎng)后，其中能繁殖的大腸桿菌中應(yīng)含有的質(zhì)粒是，原因是。發(fā)布：2024/12/29 8:0:2組卷：8引用：1難度：0.6 -
2．基因工程技術(shù)又稱為DNA重組技術(shù)，回答相關(guān)問題：
（1）在基因工程中，獲取目的基因主要有兩大途徑，即和從中分離．
（2）利用某植物的成熟葉片為材料，同時構(gòu)建cDNA文庫和基因組文庫，兩個文庫相比，cDNA文庫中含有的基因數(shù)目比基因組文庫中的少，其原因是．
（3）在基因表達載體中，啟動子是聚合酶識別并結(jié)合的部位．若采用原核生物作為基因表達載體的受體細胞，最常用的原核生物是．
（4）將目的基因?qū)胫参锛毎麜r，采用最多的方法是法．發(fā)布：2024/12/29 8:0:2組卷：2引用：1難度：0.3 -
3．基因治療是指將外源正?；?qū)氚屑毎?，以糾正或補償因基因缺陷和異常引起的疾病，以達到治療的目的．干擾素基因缺失的小鼠不能產(chǎn)生成熟淋巴細胞，科研人員利用胚胎干細胞（ES細胞）對干擾素基因缺失的小鼠進行了基因治療．請回答：
（1）為使干擾素基因在小鼠細胞中高效表達，需要把來自cDNA文庫的干擾素基因片段正確插入基因表達載體的和之間．
（2）將干擾素基因?qū)隕S細胞的方法是，采用可以鑒定目的基因是否插入到受體細胞染色體DNA分子上，再將能正常表達干擾素的細胞轉(zhuǎn)入到小鼠體內(nèi)，這種治療方法稱為．導(dǎo)入ES細胞而不是導(dǎo)入上皮細胞是因為ES細胞在功能上具有．
（3）干擾素基因缺失的小鼠易患某種細菌導(dǎo)致的肺炎，引起這種現(xiàn)象的原因是小鼠缺少成熟的淋巴細胞，降低了小鼠免疫系統(tǒng)的功能．
（4）用于基因治療的基因有三類，一類是把正?；?qū)胗谢蛉毕莸募毎?，以表達出正常性狀來治療，第二類是反義基因，即通過產(chǎn)生的mRNA分子與病變基因產(chǎn)生的進行互補結(jié)合，來阻斷非正常蛋白質(zhì)的合成；第三類是編碼可以殺死癌細胞的蛋白酶基因．發(fā)布：2024/12/29 8:0:2組卷：24引用：2難度：0.5
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