煙草是有重要經(jīng)濟價值的雙子葉植物，易受TMV（煙草花葉病毒）感染而大幅度減產(chǎn)。絞股藍細胞中含有抗TMV基因，能抵抗TMV感染。研究人員利用轉(zhuǎn)基因技術(shù)培育出了抗TMV的煙草，操作流程如圖所示?；卮鹣铝袉栴}：

（1）過程①的產(chǎn)物可構(gòu)建

cDNA（或部分基因文庫）

cDNA（或部分基因文庫）

文庫，進而獲得所需目的基因，該文庫不同于基因組文庫的特點有

文庫較小、基因中沒有啟動子、基因中沒有內(nèi)含子、只含某種生物部分基因、全部基因可在物種間進行交流

文庫較小、基因中沒有啟動子、基因中沒有內(nèi)含子、只含某種生物部分基因、全部基因可在物種間進行交流

（答出三點即可）。
（2）大量擴增目的基因可以使用PCR技術(shù)，該技術(shù)包括變性、復性、延伸三個步驟，變性這一步驟的目的是

使DNA解旋（為單鏈）

使DNA解旋（為單鏈）

。
（3）在構(gòu)建基因表達載體時，常用兩種不同的限制酶切割目的基因和質(zhì)粒，獲得不同的黏性末端，其主要目的是

防止目的基因或質(zhì)粒自身環(huán)化

防止目的基因或質(zhì)粒自身環(huán)化

。
（4）過程④最常用的方法是

農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法

農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法

。
（5）過程⑥還需要進行基因工程操作步驟中的

目的基因的檢測與鑒定

目的基因的檢測與鑒定

，其中，在個體水平上檢驗獲得的煙草是否抗TMV的方法是

用TMV感染煙草，觀察煙草是否被感染（或患?。?/div>

用TMV感染煙草，觀察煙草是否被感染（或患病）

。