環(huán)狀定點誘變技術(shù)通過設(shè)計特定引物進(jìn)行PCR，來實現(xiàn)目標(biāo)載體的單堿基突變，從而生產(chǎn)出滿足需求的質(zhì)粒載體。質(zhì)粒 pUC18中含有限制酶 Eam1105Ⅰ（識別序列為5'-GACGGGAGTC-3'）和EcoRⅠ的識別序列。為使質(zhì)粒pUC18不能被限制酶Eam1105Ⅰ識別，但依然具有氨芐青霉素抗性，現(xiàn)對質(zhì)粒pUC18第1695個堿基（圖方框中的堿基）進(jìn)行誘變，設(shè)計了具有誘變位點的引物P1和不具有誘變位點的引物P2。具體操作流程如圖所示。
（1）為使誘變后的質(zhì)粒不能被限制酶 Eaml105Ⅰ識別，但依然具有氨芐青霉素抗性，選擇質(zhì)粒突變位點時應(yīng)注意 誘變的位點位于限制酶Eam1105Ⅰ識別序列中，誘變后編碼的氨基酸不變或不影響氨芐青霉素基因的正常表達(dá)誘變的位點位于限制酶Eam1105Ⅰ識別序列中，誘變后編碼的氨基酸不變或不影響氨芐青霉素基因的正常表達(dá)。
（2）進(jìn)行上述PCR反應(yīng)，緩沖液中需提供pUC18質(zhì)粒，P1、P2兩種引物以及 耐高溫DNA聚合酶、四種脫氧核苷酸耐高溫DNA聚合酶、四種脫氧核苷酸，同時通過控制溫度使DNA復(fù)制在體外反復(fù)進(jìn)行。至少經(jīng)過 22個循環(huán)，會出現(xiàn)雙鏈均被誘變的線性質(zhì)粒。擴(kuò)增得到的線性質(zhì)粒需在 T4DNA連接T4DNA連接酶的作用下才能連接成環(huán)狀質(zhì)粒。
（3）提取連接產(chǎn)物（環(huán)化后的質(zhì)粒），經(jīng)過 EcoRⅠ、Eaml105Ⅰ雙酶切，然后進(jìn)行電泳，可根據(jù)結(jié)果判斷質(zhì)粒pUC18的第1695個堿基誘變是否成功，判斷的理由是 誘變后質(zhì)粒的電泳圖譜中只有1條條帶，未誘變質(zhì)粒會出現(xiàn)2條條帶誘變后質(zhì)粒的電泳圖譜中只有1條條帶，未誘變質(zhì)粒會出現(xiàn)2條條帶。
【答案】誘變的位點位于限制酶Eam1105Ⅰ識別序列中，誘變后編碼的氨基酸不變或不影響氨芐青霉素基因的正常表達(dá)；耐高溫DNA聚合酶、四種脫氧核苷酸；2；T4DNA連接；誘變后質(zhì)粒的電泳圖譜中只有1條條帶，未誘變質(zhì)粒會出現(xiàn)2條條帶
【解答】
【點評】
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發(fā)布：2024/5/30 8:0:9組卷：21引用：4難度：0.6
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1．下列有關(guān)基因工程技術(shù)和蛋白質(zhì)工程技術(shù)敘述正確的是（ ）
發(fā)布：2025/1/5 8:0:1組卷：6引用：1難度：0.7 -
2．下列有關(guān)基因工程的敘述，正確的是（ ?。?/h2>
發(fā)布：2024/12/31 5:0:5組卷：3引用：2難度：0.7 -
3．幾丁質(zhì)是許多真菌細(xì)胞壁的重要成分，幾丁質(zhì)酶可催化幾丁質(zhì)水解。通過基因工程將幾丁質(zhì)酶基因轉(zhuǎn)入植物體內(nèi)，可增強(qiáng)其抗真菌病的能力?；卮鹣铝袉栴}：
（1）基因工程中所用的目的基因可以人工合成，也可以從基因文庫中獲得?；蛭膸彀?和。
（2）生物體細(xì)胞內(nèi)的DNA復(fù)制開始時，解開DNA雙鏈的酶是。在體外利用PCR技術(shù)擴(kuò)增目的基因時，使反應(yīng)體系中的模板DNA解鏈為單鏈的條件是。上述兩個解鏈過程的共同點是破壞了DNA雙鏈分子中的。
（3）DNA連接酶是將兩個DNA片段連接起來的酶，常見的有和，其中既能連接黏性末端又能連接平末端的是。當(dāng)幾丁質(zhì)酶基因和質(zhì)粒載體連接時，DNA連接酶催化形成的化學(xué)鍵是。
（4）提取RNA時，提取液中需添加RNA酶抑制劑，其目的是。
（5）若獲得的轉(zhuǎn)基因植株（幾丁質(zhì)酶基因已經(jīng)整合到植物的基因組中）抗真菌病的能力沒有提高，根據(jù)中心法則分析，其可能的原因是。發(fā)布：2025/1/5 8:0:1組卷：2引用：2難度：0.6
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