科研人員利用農桿菌轉化法將抗除草劑基因導入甘藍，過程如圖1所示，①～④為操作步驟，BamHⅠ、BglⅡ、EcoRⅠ酶切位點唯一，識別序列和切割位點見表。
| 限制酶 | 識別序列和切割位點 |
| BamHⅠ | -G↓GATCC- |
| Bg1Ⅱ | -A↓GATCT- |
| EcoRⅠ | -G↓AATTC- |
基因表達載體的構建
基因表達載體的構建
，其目的是 使目的基因在受體細胞中穩(wěn)定存在，并可以遺傳給下一代，同時，使目的基因能夠表達和發(fā)揮作用
使目的基因在受體細胞中穩(wěn)定存在，并可以遺傳給下一代，同時，使目的基因能夠表達和發(fā)揮作用
。（2）若目的基因用BamHⅠ和BglⅡ剪切，質粒用BamHⅠ剪切，剪切后的目的基因和質粒能連接在一起，原因是
BamHI和BglⅡ切割DNA后產生相同的黏性末端
BamHI和BglⅡ切割DNA后產生相同的黏性末端
。酶切后的目的基因存在正向與反向兩種連接方式，可用 BamHI和EcoRI
BamHI和EcoRI
酶對兩種重組質粒進行剪切，通過凝膠電泳分析產物大小進行區(qū)分，如圖2所示，圖中 樣品2
樣品2
（樣品1/樣品2）為所需基因表達載體。（3）步驟②用
Ca2+
Ca2+
處理農桿菌后獲得容易吸收周圍環(huán)境中DNA分子狀態(tài)的細胞，以便將重組質粒導入。步驟③將農桿菌與甘藍愈傷組織共同培養(yǎng)后，在步驟④的培養(yǎng)基中添加 潮霉素
潮霉素
以便篩選出含目的基因的甘藍植株。若要檢測甘藍是否具有抗除草劑的性狀，需要在個體水平進行鑒定，方法是 噴灑適宜濃度的除草劑
噴灑適宜濃度的除草劑
。【考點】基因工程的操作過程綜合．
【答案】基因表達載體的構建；使目的基因在受體細胞中穩(wěn)定存在，并可以遺傳給下一代，同時，使目的基因能夠表達和發(fā)揮作用；BamHI和BglⅡ切割DNA后產生相同的黏性末端；BamHI和EcoRI；樣品2；Ca2+；潮霉素；噴灑適宜濃度的除草劑
【解答】
【點評】
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